Urīna un siekalu testi tuberkulozes ārstēšanai

Dažādu testu dažādība tuberkulozei ir izskaidrojama nevis ar šīs slimības diagnozes vieglumu, bet gan ar viltību. Kopš seniem laikiem cilvēki ir mēģinājuši atrast veidu, kā agrīnā stadijā identificēt ftumus, un tāpēc veica dažādus pacientu pētījumus, no kuriem daži patiešām pieraduši kā slimības diagnosticēšanas metodes vai slimības procesa novērošanas metodes.

Kādas ir urīna un siekalu pārbaudes?

Lai uztvertu patogēnu klātbūtni organismā, tiek veikta siekalu un urīna tuberkulozes tvertnes tests. Tajā pašā laikā šo pētījumu mērķis, visticamāk, apstiprina slimību ar esošajiem simptomiem un to nevar atrast, jo sākotnēji profilaktiskā diagnoze ir daudzas citas ticamākas metodes.

Turklāt ārsti var veikt urīna vai krēpu testu, kā arī analizēt siekalu par tuberkulozi, lai identificētu slimības slēgtas formas pārejas procesu uz atvērtību, un to raksturo liela skaita baktēriju atbrīvošanās no dabīgiem šķidrumiem un pacienta izkārnījumiem, un tādējādi tas kļūst ļoti epidemioloģiski bīstams citiem.

Urīna tests

Atbilde uz jautājumu, kā urīnskābes testu veikt tuberkulozes ārstēšanai, ir diezgan vienkārša. Urīna tuberkulozei tiek savākta tāpat kā jebkura šī šķidruma vispārējā analīze, kas visiem pazīstama kopš bērnības:

  1. No rīta ir nepieciešams savākt pirmo urīna daļu, savācot tikai vidējo daļu, nevis pirmo, kas iet pirmajā vai pēdējā.
  2. Pirms savākšanas rūpīgi jāmazgā gan traukā, gan urīnā esošie orgāni, lai netiktu iekļauti burkas: proteīni, asinis, baktērijas utt.
  3. Nepieciešamais šķidruma daudzums pētījumam ir tikai 50-100 ml, tādēļ nevajadzētu nest pusi litru urīna.

OAM var lietot jebkurā klīnikā, tomēr tuberkulozes baktērijas var atrast tikai īpašās laboratorijās, kuras nav pieejamas visās Krievijas vietās. Parasti šīs aptaujas rezultāti ir šādi:

  1. Krāsa: dzeltena, saulainā dzeltenā krāsā vai salmiņā.
  2. Caurspīdīgums: augsts.
  3. Smarža: nepastāvīgs.
  4. PH reakcija: 4-7.
  5. Blīvums: 1012-1022 g / l.
  6. Olbaltumviela: nē, bet dažreiz līdz 0,033 g / l ir pieņemama.
  7. Glikoze: līdz 0,8 mmol / l.
  8. Ketonu struktūras: nē.
  9. Bilirubīns: nē.
  10. Urobilinogēns: 5-10 mg / l.
  11. Hemoglobīns: nē.
  12. Eritrocīti: sievietēm maksimālā pieļaujamā vērtība ir līdz trim, bet vīriešiem - pat 1.
  13. Leikocīti: pieļaujamais ķermeņu skaits redzes laukā ir līdz 6 sievietēm un līdz 3 vīriešiem.
  14. Epitēlija šūnas: līdz 10 gab. redzēt.
  15. Cilindri: nav klāt vai viens hialīns.
  16. Sāls: nē.
  17. Baktērijas: nē.
  18. Sēnes: nē
  19. Parazīti: nē, bet ja tāds ir, tad tas nav briesmīgi: tieši šajā gadījumā tiek veikta terapija ar anthelmintiskām zālēm.

OAM tuberkulozes likmes parasti paliek nemainīgas. Vienīgais izņēmums ir akūtas slimības formas, kad urīns mainās iekšējo orgānu pārtraukuma dēļ, kā arī hroniski plaušu vai kaulu bojājumi, kad analīzē var būt amiloidozes pazīmes - olbaltumvielu metabolisma pārkāpums, kurā pārbaudes rezultāti satur olbaltumvielu.

Izņēmums ir nieru vai urīnceļu tuberkuloze - visbiežāk sastopamā ārpuslīnijas slimības forma, ko izraisa infekcijas pārnešana no asinsrites, kurā urīna analīze līdz tuberkulozei ievērojami atšķiras. Šajā gadījumā novēro šādas parādības:

  • strauji skābi noturīga reakcija;
  • leikociturija - leikocīti urīnā;
  • proteīnūrija - olbaltumviela urīnā;
  • eritrocitrija - asinis urīnā;
  • pīrojija - urīnā.

Arī akūtajā slimības formā vai nieru un urīnceļu tuberkulozes laikā urīnā ir aktīva patogēnu baktēriju forma, ko nosaka pēc Zil-Nelson krāsošanas metodes.

Asinis tests

Faktiski BAC nerada tuberkulozes siekalu analīzi. Analizējot siekalu daudzumu, cilvēki, kas nezina, sauc par tuberkulozes krēpju izpēti. Tā vietā, lai varētu veikt krēpu testu, tuberkulozes siekalu analīze var tikt veikta tikai ļoti mazu jaundzimušo bērnu gadījumā, kuri nespēj izslīdēt spoli, jo tie automātiski norij tieši tūlīt pēc izsitumiem. Tomēr šajā gadījumā ārsti vienkārši ņem biopsiju no audiem vai atsūta plaušu sekrēciju ar zondi un neplūst ar siekalām.

Patogēna krēpu analīze tiek veikta arī, izmantojot Ziehl-Nelson metodi. Papildus bacilliem dažas plaušu patoloģijas pazīmes var tikt ņemtas vērā ar neapbruņotu aci: šķiedrveida kaulus, puvi, asinis, audu gabaliņus un tā sauktos lēcas - lielus ieslēgumus ar pinhead vai mazāku apaļu formu, kuru vidū parasti ir ļoti daudz baciļu.

Ziehl-Nelson krāsošanas metode

Ziel-Nelson krāsošanas metode ir balstīta uz Mycobacterium tuberculosis skābju pretestību, kuru var krāsot tikai ar termoapstrādi. Šajā pētījumā ķermeņa audi, krūtiņa, urīns, asinis vai jebkura cita viela, kuras analīze par MBT klātbūtni ir jādara, paliek labvēlīgā vidē reprodukcijas baktēriju stādīšanai, ja tie, protams, tur ir apsildāmi un krāsoti. Pēc tam viss tiek turēts skābē līdz krāsas maiņai un atkal krāsots bez sildīšanas citai krāsai. Tā rezultātā biroju ir diezgan viegli atklāt, jo tās paliek pirmās krāsas krāsas un izceļas labi pret vispārējo fonu.

Ftizioloģijas piezīmju grāmatiņa - tuberkuloze

Viss, ko vēlaties uzzināt par tuberkulozi

Asins un urīna analīzes tuberkulozes pārbaudēm

V.A. Koshechkin, Z.A. Ivanova

Sarkano asins elementi, kā likums, maz mainās ar tuberkulozi. Tikai pēc akūtas asins zuduma plaušās vai zarnās var novērot anēmiju. Hemoglobīna nelielu samazināšanos var redzēt hroniskas fibro-kaļķainas plaušu tuberkulozes formās.

Viens no tuberkulozes procesa aktivitātes rādītājiem ir ESR (eritrocītu sedimentācijas ātrums). Paātrināta ESR korelē ne tikai ar pašreizējā svaiga procesa darbību un apjomu, bet arī ar hronisku, it īpaši fibrokauronu procesu pastiprināšanos.

Asins leikocītu frakcijas elementi aktīvāk reaģē uz tuberkulozes procesu.
Tradicionāli ir trīs fāzes izmaiņas asins leikocītu frakcijā, kas saistītas ar plaušu tuberkulozes bojājumu raksturu.
1. Cīņas neitrofilo fāze. Asinīs neitrofilu īpatsvars ir palielināts, tādēļ formula tiek mainīta uz kreiso pusi. Eozinofīli nav, limfocītu un monocītu skaits ir samazināts.
2. Monocītu fāze - infekcijas pārvarēšana. Asinīs palielinās limfocītu skaits, asins formula tiek pārvietota pa kreisi, tiek samazināts neitrofilu skaits, konstatēti atsevišķi eozinofīli.
3. Fāzes atveseļošana. Limfocītu un eozinofilu īpatsvars ir palielināts. Asins skaitīšana pakāpeniski normalizējas.
Šī sadalīšana fāzēs atspoguļo tikai vispārējo asins reakciju.

Nuclear neutrofilu maiņa tuberkulozes gadījumā
Neitrofilu grupai papildus kvantitatīvai ir arī kvalitatīva īpašība, kas ir daudz plānāka un agrāk norāda uz dažādiem patoloģiskiem procesiem.

Pieaugušā tuberkuloze parasti ir sekundārs process, visbiežāk tas izraisa tikai stabila neitrofilu līmeņa palielināšanos asinīs. Ar izteiktām infiltrācijas-pneimonijas formām un plaušu audu sadalīšanās parādībām, neitrofilu pārvietošana pa kreisi tiek atklāta diezgan skaidri un var sasniegt līdz pat 20-30% no band-core.

Plaušu infiltrāts nesadalās, un tuberkulozes fokālās formas tās pirmās atklāšanas vai paasināšanās laikā zem temperatūras un zemas pakāpes funkcionālajiem traucējumiem dod mazāk izteiktu pāreju. Tomēr atlikušie hemograma elementi vispār nevar konstatēt novirzes. Tādēļ tuberkulozes īpaša nozīme ir rūpīgas kodolpārvietojuma definīcijas.

Arnet (1905) doktrīnu par neitrofilu kodolpāreju izstrādāja, pamatojoties uz pētījumu par asinīm dažādās infekcijas, tai skaitā tuberkulozes.

Veicot sarežģītus aprēķinus ar daudzām skicēm, Arneth pamanīja dažu neitrofilu kodolu konfigurācijas regularitāti.

Veselīgas personas asinis satur:

  • 5% neitrofilu ar neatšķaidītu reklāmkarogu, nesadalītu kodolu (I klase);
  • 35% neitrofilu ar diviem segmentiem, kas saistīti ar vītņu tipa sašaurinājumu (II klase);
  • 41% neitrofilu ar trim segmentiem (III klase);
  • 17% neitrofilu ar četriem segmentiem (IV klase);
  • 2% neitrofilu ar pieciem segmentiem (V klases).

Arnets papildus segmenta segmentam pieņēma savu formu. Tādējādi pirmajai klasei viņš izraudzījās vairākas apakšklases pēc nesadalītā kodola ievilkšanas pakāpes. Atlikušās klases tiek iedalītas apakšklasēs atkarībā no segmentu formas.

Infekcijas proporcionāli to smaguma pakāpei samazinās daudzu segmentu formu skaits, palielinās mazu segmentēto (2-3 segmentu) un nesadalītu (kas ir salīdzinoši jauni šūnas) skaits.

In Arneth shēmā, nesadalītu I klases neitrofilu skaits ir redzams kreisajā pusē; labajā pusē atrodas II klases šūnu skaits, pēc tam III klase utt. Līdz ar to, palielinoties nesadalītas un mazizmēra formām, šūnu skaits ķēdes kreisajā pusē palielinās un ir "kreisā pāreja".

Urīna analīze
Urīna izdalīšanās tuberkulozes slimniekiem ir gandrīz normāla. Patoloģiskas pārmaiņas urīnā var izraisīt nieru vai urīnceļu tuberkulozes sabojāšanos.
Pacientiem ar hroniskām plaušu tuberkulozes formām var konstatēt amiloidozes pazīmes.

3.7. Asins un urīna analīze.

Sarkano asins elementi, kā likums, maz mainās ar tuberkulozi. Tikai pēc akūtas asins zuduma plaušās vai zarnās var novērot anēmiju. Hemoglobīna nelielu samazināšanos var redzēt hroniskas fibro-kaļķainas plaušu tuberkulozes formās. Viens no tuberkulozes aktivitātes rādītājiem ir ESR (eritrocītu sedimentācijas ātrums). Paātrināta ESR korelē ne tikai ar pašreizējā svaiga procesa darbību un apjomu, bet arī ar hronisku, it īpaši fibrokauronozu procesu saasināšanos. Asins leikocītu frakcijas elementi aktīvāk reaģē uz tuberkulozes procesu.

Tradicionāli ir trīs fāzes izmaiņas asins leikocītu frakcijā, kas saistītas ar plaušu tuberkulozes bojājumiem:

  1. Neitrofils - cīņas fāze. Asinīs palielinās neitrofilu īpatsvars, tādēļ asins formulas izmaiņas ir pa kreisi. Eozinofīli nav, limfocītu un monocītu skaits ir samazināts. Limfopēnija ir raksturīga progresējošām tuberkulozes formām.
  2. Monocītu fāze - infekcijas pārvarēšana. Asinīs palielinās limfocītu skaits, asins formula tiek pārvietota pa kreisi, tiek samazināts neitrofilu skaits, konstatēti atsevišķi eozinofīli.
  3. Atgūšanas fāze Limfocītu un eozinofilu īpatsvars ir palielināts. Asins skaitīšana pakāpeniski normalizējas.

Šāda sadalīšana fāzēs atspoguļo tikai vispārējās asinsreakcijas, kas neatspoguļo asinsreakcijas hronisku tuberkulozes infekciju sarežģītību.

Nuclear neutrofilu maiņa tuberkulozes gadījumā.
Neitrofilu grupai papildus kvantitatīvai ir arī kvalitatīva īpašība, kas ir daudz plānāka un agrāk norāda uz dažādiem patoloģiskiem procesiem. Pieaugušā tuberkuloze, parasti pēc primārais process, visbiežāk izraisa tikai stabila neitrofilu palielināšanos asinīs. Ar izteiktām infiltrējošām pneimoniskām formām un ar plaušu audu sadalīšanās parādībām, neitrofilu maiņa pa kreisi tiek skaidri atklāta un var sasniegt 20-30% stab.

Plaušu infiltrācija bez desintegrācijas un fokālās tuberkulozes formas to pirmās noteikšanas vai saasināšanās laikā subfebrīla temperatūrā un zemas pakāpes funkcionālie traucējumi dod mazāk izteiktu pāreju. Tajā pašā laikā pārējiem hemogramas elementiem var būt pilnīgi novirzes. Tādēļ padziļināta kodolpārvietojuma definīcija izpaužas kā diagnosticējoša vērtība tuberkulozes gadījumā.
Arnetha (Arneth) pētījums par neitrofilo kodolizvietojumu tika izstrādāts, pamatojoties uz asins pētījumu dažādās infekcijas un it īpaši tuberkulozes gadījumā. Veicot sarežģītus aprēķinus ar daudzām skicēm, Arneth pamanīja dažu neitrofilu kodolu konfigurācijas regularitāti. Vesela cilvēka asinīs neitrofīli ar neatšķaidītiem reklāmkarogiem, nesaistītā kodols (I klase) ir 5%; neitrofīli ar diviem segmentiem, kas saistīti ar šķiedru sašaurināšanos (II klase) - 35%, III klase - 41%, IV klase - 17% un V klase - 2%. Infekcijas proporcionāli to smaguma pakāpei mazinās daudzu segmentētu formu skaits, aug mazu segmentēto (2-3 segmentu) un nešķiroto skaitļu skaits. Arneth shēmā neierobežoto neitrofilu skaits ir rakstīts pa kreisi; pa labi ir II klases šūnu skaits, pēc tam III klase utt. Līdz ar to, palielinoties ne segmentētām un mazāk segmentētām formām, ķēdes kreisajā pusē palielinās šūnu skaits un notiek "kreisā pāreja".

Tuberkulozes procesa pazīmes, papildus hemogramas izmaiņām, ir hiponatriēmija. Tas ir visizplatītākais metabolisma cikls. Hiponatriēmijas cēlonis ir plaušu tuberkulozes skartā antidiurētiskā hormona viela. Īpaši intensīvi šī viela tiek ražota kopējo gadījuma destruktīvo formu periodā.

Urīna analīze
Urīna izdalīšanās tuberkulozes slimniekiem ir gandrīz normāla. Patoloģiskas pārmaiņas urīnā var izraisīt nieru vai urīnceļu tuberkulozes sabojāšanos. Olbaltumvielas, leikocīti, MBT tiek atklāti urīnā. Pacientiem ar hronisku plaušu vai kaulu tuberkulozi var konstatēt amiloidozes pazīmes (izturīga pururija, bruto hematūrija).

Tuberkulozes diagnostika asinīs un urīnā

Sarkano asins elementi, kā likums, maz mainās ar tuberkulozi. Tikai pēc akūtas asins zuduma plaušās vai zarnās var novērot anēmiju. Hemoglobīna nelielu samazināšanos var novērot hroniskas fibroārās kaļķakmens plaušu tuberkulozes formās.

Viens no tuberkulozes procesa aktivitātes rādītājiem ir ESR (eritrocītu sedimentācijas ātrums). Paātrināta ESR korelē ne tikai ar pašreizējā svaiga procesa aktivitāti un apmēru, bet arī ar hronisku, it īpaši fibrocavernous procesu saasināšanos.

Asins leikocītu frakcijas elementi aktīvāk reaģē uz tuberkulozes procesu.

Tradicionāli ir trīs fāzes izmaiņas asins leikocītu frakcijā, kas saistītas ar plaušu tuberkulozes bojājumu raksturu.

  1. Neitrofila fāze cīņā. Asinīs neitrofilu īpatsvars ir palielināts, tādēļ formula tiek mainīta uz kreiso pusi. Eozinofīli nav, limfocītu un monocītu skaits ir samazināts.
  2. Monocītu fāze - infekcijas pārvarēšana. Asinīs palielinās limfocītu skaits, asins formula tiek pārvietota pa kreisi, tiek samazināts neitrofilu skaits, konstatēti atsevišķi eozinofīli.
  3. Atgūšanas fāze Limfocītu un eozinofilu īpatsvars ir palielināts. Asins skaitīšana pakāpeniski normalizējas.

Šī sadalīšana fāzēs atspoguļo tikai vispārējo asins reakciju.

Nuclear neutrofilu maiņa tuberkulozes gadījumā

Neitrofilu grupai papildus kvantitatīvai ir arī kvalitatīva raksturojums, kas ir daudz plānāks un agrāk parāda dažādus patoloģiskus procesus.

Pieaugušā tuberkuloze parasti ir sekundārs process, visbiežāk tas izraisa tikai stabila neitrofilu līmeņa palielināšanos asinīs. Ar izteiktām infiltrācijas-pneimonijas formām un plaušu audu sadalīšanās parādībām, neitrofilu pārvietošana pa kreisi tiek atklāta diezgan skaidri un var sasniegt līdz pat 20-30% no band-core.

Plaušu infiltrāts nesadalās, un tuberkulozes fokālās formas tās pirmās atklāšanas vai paasināšanās laikā zem temperatūras un zemas pakāpes funkcionālajiem traucējumiem dod mazāk izteiktu pāreju. Tomēr atlikušie hemograma elementi vispār nevar konstatēt novirzes. Tādēļ tuberkulozes īpaša nozīme ir rūpīgas kodolpārvietojuma definīcijas.

Arnet (1905) doktrīnu par neitrofilu kodolpāreju izstrādāja, pamatojoties uz pētījumu par asinīm dažādās infekcijas, tai skaitā tuberkulozes.

Veicot sarežģītus aprēķinus ar daudzām skicēm, Arneth pamanīja dažu neitrofilu kodolu konfigurācijas regularitāti. Veselīgas personas asinis satur:

  • 5% neitrofilu ar neatšķaidītu vafli, nesadalīts kodols (I klase);
  • 35% neitrofilu ar diviem segmentiem, kas saistīti ar vītņu tipa sašaurinājumu (II klase);
  • 41% neitrofilu ar trim segmentiem (III klase);
  • 17% neitrofilu ar četriem segmentiem (IV klase);
  • 2% neitrofilu ar pieciem segmentiem (V klases).

Arnets papildus segmenta segmentam pieņēma savu formu. Tādējādi klasē viņš izraudzījās vairākas apakšklases pēc nesadalītā kodola depresijas pakāpes. Atlikušās klases tiek iedalītas apakšklasēs atkarībā no segmentu formas.

Infekcijās proporcionāli to nopietnībai samazinās daudzu segmentu formu skaits, palielinās mazu segmentēto (2-3 segmentu) un nesadalītu (kas ir salīdzinoši jauni šūnas) skaits. In Arneth shēmā, nesadalītu I klases neitrofilu skaits ir redzams kreisajā pusē; labajā pusē atrodas II klases šūnu skaits, pēc tam III klase utt. Līdz ar to, palielinoties nesadalītas un mazizmēra formām, šūnu skaits ķēdes kreisajā pusē palielinās un ir "kreisā pāreja".

Urīna analīze

Urīna izdalīšanās tuberkulozes slimniekiem ir gandrīz normāla. Patoloģiskas pārmaiņas urīnā var izraisīt nieru vai urīnceļu tuberkulozes sabojāšanos.

Pacientiem ar hroniskām plaušu tuberkulozes formām var konstatēt amiloidozes pazīmes.

35. Asins un urīna analīžu diagnostiskā vērtība pacientiem ar tuberkulozi.

Asins analīzes Hemoglobīns un sarkano asins šūnu daudzums vairumā gadījumu nemainās, izņemot gadījumus, kad vērojams akūts asins zudums. Indikators, kas norāda uz aktīvā tuberkulozes procesa klātbūtni, ir eritrocītu sedimentācijas ātrums. Paātrināta ESR ir raksturīga ne tikai svaigai aktīvajai tuberkulozei, bet arī hroniska procesa paasināšanai. Pārējie asins analīzes rādītāji ievērojami atšķiras atkarībā no plaušu traumas veida. Rādītāju izmaiņas asinis, kad tuberk. trūkst specifikas, tomēr hemogrāfs palīdz diagnostikai. tuberk fāze. apstrādāt un novērtēt slogu. viņa plūsma Aptaujātie tuberkulozes un tuberkulozes slimniekiem. kas piešķirts kopējam ķīlim. asins analīze ar ESR definīciju, satura eritr. un leikocīti., hemogloba koncentrācija un leikocītu formulas aprēķināšana. Pacienti ar tuberkulozi, ieelpojot klimatisko slimību. noteikt retikulocītu skaitu, lai novērtētu reģenerāciju. kaulu smadzeņu spējas diferenciālas diagnostikas gadījumos - trombocītu skaits. Hematologs mainās. rādītāji ir atkarīgi, no vienas puses, no lokalizācijas, rakstura un infekcijas smaguma pakāpes. no otras puses - no iestādes stāvokļa, tās kompensējošās rezerves. Hemograms har. drīzāk procesa fāze nekā tā ķīlis. forma. Piemēram, pacientiem ar kopēju destruktīvu tuberkulozes formu ar kompensācijas procesu un svaigu iekaisumu trūkumu. Izmaiņas asiņu attēlā var būt normāli. Asināšana caurules. parasti šo procesu papildina neitrofilu pietura, limfopēnija un ESR palielināšanās. Kopā leikocītu saturs np. lielākā daļa pacientu ir normālā diapazonā. Tikai akūtu un smagu gaitu raksturo leikocītu satura palielināšanās asinīs līdz 15 x 109 / l. Leikocītu formulas neitrofīlo maiņu pa kreisi tajā pašā laikā kļūst nozīmīgāka. Smagos slimības gadījumos (īpaši miliāru tuberkulozes gadījumā) var rasties mieloīdo tipa leikēmijas reakcija. Akūta procesa atvieglošana izraisa šo izmaiņu normalizāciju, limfocitozes parādīšanos. Hroniskas hematogēnas izkliedētas un fokālās tuberkulozes gadījumā var novērot neitropēniju un limfocitozi.

Urīna analīze Analizējot urīnu pacientam ar plaušu tuberkulozi, nav novērojamu noviržu no normām. Izmaiņas parādās tikai nieru un urīnceļu tuberkulozajos bojājumos. Parastā tuberkulozes urīna analīze ir nepieciešama ne tikai tad, ja ir aizdomas par nieru bojājumu. Pēdējā gadījums viņš ir viens. agrīnai diagnostikai. Pastāvīga urīna klātbūtne urīnā un, pats galvenais, tubūms. baktērijas, protams, norāda uz kubli. nieres. Tomēr dažreiz tas ir jāatkārto. Izlikts urīns, lai atklātu patologu. atrod; tāpēc ar dažiem. tuberkulozes formas ikmēneša urīna tests (izplatīta forma, sarežģīta primārā kompleksa). Nelielas izmaiņas urīnā kā olbaltumvielu pēdas, vienreizējas. leikocītus un svaigus eritrocītus var periodiski noteikt kā vispārējas intoksikācijas parādības. Visbeidzot, dažas reakcijas ar urīnu liecina par procesa smaguma pakāpi. Starp tiem ir diazo reakcijas parādīšanās vispārināšanas laikā. tuberkulozes formas, īpaši miliāru tuberkulozi.

Bez šaubām, tuberkulozes prognostiskā vērtība ir urohromogēnais šķīdums. Tas ir ļoti vienkārši, un tā ir tā lieliskā priekšrocība. Viņa ir izgatavota. nākamais veids: ņem filtrētu urīnu un atšķaida to 10 reizes. Ielieciet divās mēģnēs, vienu kalpo par kontroli, un otrai pievieno kālija permanganāta 1: 1000 šķīdumu. Pozitīva reakcija mēģenē izraisa asu kanārijas krāsošanu, kas ir ļoti skaidri redzama salīdzinājumā ar kontroli. Jāņem vērā tikai labi izteikti. krāsošana. Reakcijas mehānisms ir tāds, ka kālija permanganāts oksidē bezkrāsainu urochromogenu urīnā, progresējošas tuberkulozes gadījumā tas ir ievērojami paaugstināts.

Kādi ir testi par plaušu tuberkulozi?

Laboratoriskie testi iet visiem pacientiem. Tā kā patoloģija ir lipīga pret citiem, savlaicīga bioloģiskā materiāla izpēte veicina diagnozes precizitāti un palīdz kontrolēt ārstēšanas kursu.

Plaušu tuberkulozes laboratorisko testu saraksts

Tuberkulozes testu saraksts

Obligāto testu saraksts attiecībā uz plaušu tuberkulozi ir šāds:

  • krēpu pārbaude - klātbūtnē ir dobumi, rīsu ķermeņi, proteīni, elastīgās šķiedras, kalcija sāļi;
  • eksudāta analīze - parāda neitrofilus un endotēlija šūnas ar leikocītu pārsvaru;
  • bronhoalveolāro lavāžas analīze liecina par samazinātu alveolāro makrofāgu skaitu ar strauju neitrofilu pieaugumu aktīvā tuberkulozes procesa gaitā, nedaudz palielinoties makrofāgu rādītāju neaktīvai gaitai;
  • seroloģiskie testi vai enzīmu imunoloģiskie testi tiek pārbaudīti, lai noteiktu mikobaktēriju antigēnu seruma imūnglobulīnus. Diagnostikas antivielu titra attiecība pret slimības izraisītāju ir lielāka par 1: 8.

Ko liecina asins analīzes rezultāti?

Pateicoties asins bioķīmiskajai analīzei plaušu tuberkulozes gadījumā, speciālistiem ir iespēja noteikt proteīnu un tā frakciju izmaiņu virzienu asins serumā. Tas nosaka slimības formu un stadiju. Ir pārsniegti urīnskābes, vara, holesterīna un lizocīma līmeņi. Tiek novērota kreatīnkināzes un angiotenzīnu konvertējošā enzīma aktivitāte. Elpceļu acidoze attīstās pH samazināšanās un pCO2 pieauguma dēļ.

Attiecībā uz hemoglobīnu to samazināšana, kas izraisa anēmijas attīstību, nav raksturīga tuberkulozes procesam.

Urīna ar tuberkulozes slimniekiem

Vai veic urīnizvades testus plaušu tuberkulozes ārstēšanai?

Urīna ekskrēcija tuberkulozajos pacientiem paliek normāla. Patoloģiskas pārmaiņas parasti rodas, ja tuberkulozes procesā tiek iesaistīti nieres un urīnceļi. Pacientiem ar hronisku slimības formu amiloidozes pazīmes var konstatēt pētījuma laikā.

Kāda ir urīna analīze par plaušu tuberkulozi, kāda informācija var norādīt uz patoloģiskā procesa attīstību organismā?

  1. Blīvums ir 1,015 - 1,025.
  2. Ir atļauta viena eritrocītu klātbūtne, bērniem - ne vairāk kā 5.
  3. Balto asins šūnu skaits nedrīkst pārsniegt 2 vienības, sievietēm un meitenēm - līdz 5 vienībām.
  4. Sāls vērtības nedrīkst būt nozīmīgas.
  5. Plakanā epitēlija pieļaujamā vērtība ir līdz 5 vienībām.

Kāda būs asins analīze par plaušu tuberkulozi

Tuberkuloze ir bīstama un grūti ārstējama slimība. Ārstēšanas efektivitāte ir atkarīga no tā, cik savlaicīgi tā tika konstatēta. Neviens nav apdrošināts pret infekciju, absolūti visi var saslimt - pieaugušie, bērni, veci cilvēki.

Tā kā nav nepieciešama savlaicīga ārstēšana, slēgtā forma kļūst par bīstamu atvērtu, tādēļ diagnoze slimības agrīnajā stadijā ir ārkārtīgi svarīga, un to var panākt ar regulārām un visaptverošām pārbaudēm.

Šajā rakstā mēs aplūkosim dažādas metodes, kā diagnosticēt šo plaušu slimību, kā arī mēģināsim noteikt, kura asins analīze par plaušu tuberkulozi ir visticamākā un informatīvākā.

Kad rodas nepieciešamība pārbaudīt tuberkulozi

Tātad eksāmens ir nepieciešams:

  • saskare ar slimības nesējiem;
  • vispārējs vājums;
  • svara zudums;
  • temperatūras paaugstināšanās vakarā;
  • hronisks klepus.

Īpaši svarīgi ir laikus noteikt tuberkulozes klātbūtni bērnībā, jo bērniem ļoti iespējams, ka infekcija radīs turpmākus patoloģiskus procesus organismā.

Tas ir svarīgi! Viens no preventīvajiem pasākumiem ir BCG vakcinācija 4. dienas bērna dzīvē un 7 gadu vecumā. Bērna ķermenis ir vājāks nekā pieaugušais, tādēļ ir svarīgi to aizsargāt pret infekciju un likvidēt vakcināciju.

Pētījums par aizdomām par tuberkulozi

Tuberkulozi var noteikt vairākos veidos.


Foto 1. Pacienta ar tuberkulozi krūšu kurvja rentgena fragments. Fluorogrāfija ir viena no drošākajām metodēm šīs slimības diagnosticēšanai, bet ir visefektīvākā kopā ar citiem. Piemēram, detalizēts asins analīzes rezultāts parādīs tuberkulozi pat agrīnā stadijā.

  1. Rentgena izmeklēšana. Fluorogrāfija palīdzēs novērtēt plaušu bojājuma pakāpi. Tomēr jāpatur prātā, ka rentgena attēls neuzrāda slimības sākuma posmus. Apsekojumā jābūt visaptverošam. Lai iegūtu pilnīgāku pārbaudi, pacienta plaušas jāfotografē gan no priekšpuses, gan no aizmugures.
  2. Tuberkulīna tests. Pārbaudot bērnus, visbiežāk tiek izmantots tuberkulīna tests (Mantoux tests). Tuberkulīns ir proteīnu maisījums, kas izolēts no mirušiem patogēniem. Zāļu ievadīšana zem ādas izraisa imunitātes reakciju, kas izpaužas dažādos veidos. Ja ķermenī nav patogēnu, tad pēc pāris dienām injekcija atstās tikko pamanāmu zīmi. Injekcijas vietas iekaisuma vai abscesa veidošanās gadījumā pacienta infekcijas iespējamība ir augsta.

Tas ir svarīgi! Mantou tests neļauj noteikt tuberkulozes klātbūtni ar 100% varbūtību, tomēr tas palīdzēs noteikt slimības riska grupu. Ar rūpīgu pārbaudi jādara tiem, kas cieš no alerģijām. Ķermenis var reaģēt uz kompozīcijas ieviešanu neprognozējamā veidā.

  1. Asins analīze Rezultāti palīdz identificēt patogēnu pēdas. Iecelta, lai identificētu galīgo diagnozi un slimības apmēru.
  2. Mutes sastāvs. Mycobacterium tuberculosis klātbūtne ļauj identificēt un pētīt krēpu. Tiek konstatēts, ka materiāls pārsniedz olbaltumvielu indikatoru normu, kas to atšķir no bronhiālās krēpas, kā arī infekcijas izraisītājiem.

Vai ir iespējams noteikt tuberkulozi, veicot vispārēju asins analīzi?

Sarkano asins šūnu (sarkano asins šūnu) sastāvs baktēriju klātbūtnē nedaudz atšķiras. Akūti zarnu vai plaušu asiņošana izraisa anēmiju, ievērojamu hemoglobīna līmeņa pazemināšanos.

Ir cilvēki, kas apšauba, vai ir iespējams noteikt tuberkulozi, veicot asins analīzi. Faktiski vispārējā analīze spēj identificēt iekaisuma un patoloģisko procesu attīstību organismā saskaņā ar palielinātu ESR rādītāju. Paaugstinātā likme norāda ne tikai uz pašreizējā iekaisuma aktivitāti un ilgumu, bet arī hronisku saasinājumu, it īpaši slimības beigu stadijā.


Foto 2. Ārsts veic procedūru asiņu savākšanai no pacienta vēnas ar šļirci. Pēc tam tiks veikta asins analīze ar tuberkulozi, kuras indikatori norāda uz iekaisuma procesiem.

Tas ir svarīgi! ESR līmeni var sajaukt ar iekaisuma vai plaušu vēža indikatoriem. Šajā gadījumā ir jāpārbauda eozinofilu skaits (viens no balto asins šūnu veidiem). Ja eozinofīli tiek palielināti, un leikocītu formula rāda dramatiskas izmaiņas asins analīzē, tas notiek ar tuberkulozi un tiek izslēgts ar pneimoniju.

Vai klīniskie un bioķīmiskie asins analīzes ir precīzas?

Plaušu tuberkulozes asins analīzes bieži vien nav pietiekamas, lai diagnosticētu tuberkulozes bacillus. Tad vēl ir nepieciešama visaptveroša pārbaude. To pašu var teikt par asins bioķīmisko analīzi. Sākotnējas tuberkulozes vai latentas formas gadījumā visticamāk netiks novērotas nekādas novirzes. Un tikai akūtu slimības formu gadījumā albumīna-globulīna koeficients tajā tiks pazemināts.

Antivielu pret tuberkulozi asins analīžu veidi

Ir vairāk precīzu, padziļinātu nekā OAK metodi asins analīzes, kas ļauj atklāt tuberkulozi. Kā no šādām asins analīzēm noteikt, ja Jums ir slimība, apsveriet nākamo.

Objektīvas diagnostikas noteikšana ir iespējama, izmantojot polimerāzes ķēdes reakcijas (PCR) pieejas un ar enzīmu saistītu imūnsorbcijas testu (ELISA).

Vai ELISA metode norāda uz tuberkulozes klātbūtni

Ar ELISA palīdzību pacientam tiek konstatēta patogēno antivielu klātbūtne. Metode ir ērta, jo tā ļauj vienlaikus pārbaudīt lielu skaitu paraugu. Tomēr tai ir zema jutība un to ieteicams izmantot apgabalos ar zemu sastopamības biežumu.

Kādas izmaiņas atklāj PCR metode?

PCR metode ir viena no visefektīvākajām. To lieto, lai identificētu slimību, nosakot smaguma pakāpi un atbrīvošanos ārstēšanas laikā, atrodot mikrobu baktēriju DNS.

PCR tiek izmantots, lai:

  • Koča progresīvā zizla detektēšana;
  • ārkārtas tuberkulozes noteikšanas tests;
  • ātra infekcijas lokalizācijas loku izveide;
  • slimības atkārtošanās diagnoze;
  • ārstēšanas kursa uzraudzība.

Gan viņš, gan citi asins analīzes pret antivielām pret tuberkulozi tiek uzskatītas par pilnīgi drošām. Bet ir arī citi.

Alternatīvas asins analīzes metodes

Interferona gama izdalīšanās analīzes metode ir retāk sastopama nekā PCR un ELISA, lai noteiktu patogēnās mikrobakterijas. To var veikt, nevis tuberkulīna testu. Reakcija norāda uz gamma interferona veidošanos, reaģējot uz mikrobakteriju ievadīšanu. Rezultāti var precīzi noteikt infekcijas klātbūtni.

Vēl viena alternatīva pētīšanas metode ir QuantiFERON-TB Gold. Šo metodi visbiežāk izmanto, lai pārbaudītu bērnus, kam ir spēcīga alerģiska reakcija pret tuberkulīna testu.

Tas ir svarīgi! Abas metodes neļauj noteikt infekcijas pakāpi - aktīva vai latenta.

Ārstējošais ārsts nosaka, kurš asins analīzes veids tiks izmantots. Visbiežāk pētījums tiek veikts kompleksā. Latentās tuberkulozes asins analīzes rezultātu vispār nevar sniegt.

Kā tiek rādīti asins analīzes rādītāji

Interpretējot vispārējo asins analīzi, jāpievērš uzmanība ESR, hemoglobīna un leikocītu līmenim.

ESR līmenis veselīgam cilvēkam būs mazāks par 50 vienībām, šī indikatora pārsniegums norāda uz iekaisuma procesu organismā.

Leikocītu skaits asinīs pacientam ar tuberkulozi sasniedz 6 līdz 10 9 / l, akūtos un smagos slimības attīstības gadījumos - no 12-15 līdz 10 9 / l.

Sarkano asinsķermenīšu sastopamība lielākajā daļā pacientu paliek normāla. Zems hemoglobīns tiek reģistrēts miliāru tuberkulozes, kazeozās pneimonijas gadījumā.

Akūtas, progresējošas un sarežģītas slimības formas izmaina leikokramu. Dažos gadījumos tiek konstatēts mērens leikocitoze (līdz 10 000-15 000 leikocītu), retāk leikopēnija.

Lai ko jūs paveiktu, veicot asins analīzi plaušu tuberkulozes gadījumā, to atšifrēšana ir pieredzējušu speciālistu darbs. Tikai viņi var precīzi noteikt, kā darbojas tuberkuloze, ja tā joprojām tiek konstatēta. ELISA un PCR analīze tiek dekodēta vienādi. Īpašās formās pretēji iezīmētajai infekcijai ir redzams negatīvs vai pozitīvs rezultāts.

Ārstēšanas testu veidi

Apstrādes grūtības ir saistītas ar faktu, ka infekcija var kļūt izturīga pret jebkura veida antibiotikām, īpaši progresējošu stadiju laikā, kā arī ilgu inkubācijas periodu, kura laikā nav iespējams noteikt infekciju.

Pēc atbilstošas ​​terapijas noteikšanas un izrakstīšanas, dziedināšanas procesu uzrauga ik pēc 1-2 reizēm mēnesī. Pacientam ir asinis un flegma.


Foto 3. Medicīnas galds ārsta kabinetā pēc pacienta krēpēm tiek savākts. Putekļu paraugi ir ievietoti plastmasas mēģenēs un gaida laboratorijas testus.

Jūs varat veikt pilnīgu asins analīžu, Mantoux pārbaudes, un jūs varat veikt fluorogrāfiju gandrīz jebkurā medicīnas centrā, tas tiek darīts nekavējoties, ja rodas aizdomas. Balstoties uz iegūtajiem datiem, terapeits izdarīs secinājumu par to, ka organismā nav patoloģisku izmaiņu, vai arī tiks izsniegta atkārtota izmeklēšana slimnieku sarakstā.

Specializēti un precīzāki pētījumi tiek veikti TB ambulances, kas aprīkotas ar laboratorijām un nepieciešamajiem reaģentiem pētniecībai.

Tātad, apkopojot iepriekš minēto:

  • tuberkuloze ir bīstama slimība, kas ir ārkārtīgi svarīga laika noteikšanai;
  • pastiprināta ESR, tumšo tumšs plaušām, izmaiņas leikokramā ir pamats, lai nosūtītu pacientu tālākai pārbaudei infekcijas noteikšanai;
  • ārstēšana tiek veikta, izmantojot anti-tuberkulozes līdzekļus; Ārstēšanas intensīvā fāze turpinās, līdz tiek iegūti pozitīvi klīniskie un radioloģiskie rādītāji.

Noderīgs video

Mēs piedāvājam noskatīties video, kas arī atbild uz jautājumu, vai ir iespējams konstatēt tuberkulozi, veicot asins analīzi. Tas sīkāk apraksta QuantiFERON TB Gold quantiferona testu, kas tiek parādīts, analizējot asins tuberkulozi pēc imūnās atbildes.

Pilna tuberkulozes asins analīzes atšifrēšana pieaugušajiem un bērniem

Tuberkulozes baktērijas infekcija vairs nav cilvēka teikums. Mūsdienu medicīna izmanto efektīvus līdzekļus, lai cīnītos pret šo slimību, ja tā tiek konstatēta agrīnā stadijā. Regulāri profilaktiskie izmeklējumi un testi, ieskaitot vispārēju asins analīzi tuberkulozes ārstēšanai, palīdz patoloģiju noteikt laikā.

Izmaiņas klīniskajā attēlā

Pilnam asinsrites pētījumam plaušu tuberkulozes (UAC) nav specifisku izpausmju. Nav neviena marķiera, kas runātu par tuberkulozes attīstību un slimības stadijas noteikšanu. Bet ar nespecifiskām pazīmēm var noskaidrot latento iekaisuma procesu un aizdomas par izmaiņām plaušās.

Sarkano asins šūnu novirze no normas

Ar lēnu formu vai lokalizētu bojājumu asinsritē esošo eritrocītu skaits nemainās, bet to krāsa mainās. Hemoglobīna līmenis eritrocītos ir samazināts. Šo stāvokli sauc par hipokrēmiju.

Ar plaša spektra infiltrējošiem plaušu audu bojājumiem klīniskā asins analīze norāda uz sarkano asins šūnu skaita samazināšanos, to lieluma samazināšanos. Nematīgām šūnām parādās - retikulocīti, kas ir sarkano asins šūnu "prekursori". Tuberkulozes sākuma stadijā retikulocītu skaits nepārsniedz 0,5%.

Smaga anēmija biežāk sastopama pieaugušajiem ar progresējošu tuberkulozi. Tajā pašā laikā retikulocītu skaits palielinās līdz 1% no kopējā sarkano asins šūnu skaita.

Leikocītu maiņa

Pirmajā vietā pret slimību tiek izmantoti leikocīti kā imūnās sistēmas šūnas. Saskaņā ar vispārējo asinsanalīzi un leikokrama pētījumu tiek noteikts gan iekaisuma procesa klātbūtne, gan tā posms.

Nesarežģītā slēgtā formā ievērojami palielinās neitrofilu skaits - baltas asinsķermenīšu skaits, kas ir atbildīgi par cīņu pret baktēriju infekciju. Parādās promyelocīti - nenobriedušas leikocītu šūnas, kuras parasti nenotiek.

Ilgi, smagi plūstoša, plaušu tuberkuloze ir saistīta ar deģeneratīvām izmaiņām neitrofilos, patoloģiskas granulācijas veidošanos. Eozinofilu skaits strauji samazinās. Ir limfopēnija - limfocītu skaita samazināšanās. Visas šīs pazīmes norāda uz ilgstošu iekaisuma procesu, ko papildina pūtītes un nekrotiskās masas veidošanās.

ESR izmaiņas

Tuberkulozes noteikšana tās aktīvā fāzē palīdz ESR - eritrocītu sedimentācijas ātruma indikators. Imūnglobulīnu, fibrinogēna, uzkrāšanās veicina sarkano asinsķermenīšu nogulsnēšanos un to ātru nokrišņu veidošanos. Parasti šie asins parametri vīriešiem nav lielāki par 10 mm / h, sievietēm - 15 mm / h. ESR paātrināšanās līdz 80mm / h norāda uz iekaisuma procesa aktivizēšanu organismā.

Funkcijas rādītāji bērniem

Bērna tuberkulozes asins analīze nedaudz atšķiras no pieaugušo izmaiņām. Rezultātu atšifrēšana notiek ar vienādiem rādītājiem:

  • Slimības sākuma fāzē eritrocītu formula nedaudz mainās. Anēmija var notikt tikai destruktīvā formā. Citos gadījumos sarkano asins šūnu skaits paliek nemainīgs, savukārt nenobriedušu eritrocītu skaits palielinās. Bērniem var būt aizdomas par tuberkulozi, ja retikulocīti konstatē virs 1 ppm.
  • Leikocītu rādītāji arī tiek mainīti. Attīstās leikocitoze - palielinās balto asinsķermenīšu skaits, ko izraisa neitrofīli, un limfocītu skaits krasi samazinās. Saskaņā ar normu bērniem vecumā virs 6 gadiem 40% tuberkulozes limfocītu skaits nepārsniedz 20%.

Agrīnās slimības stadijās aug eosinofīlu skaits - šūnas, kas reaģē uz alerģisku reakciju. To straujš samazinājums parāda, ka process nonāk aktīvā fāzē.

  • Bērniem ESR nepārsniedz 10 mm / h. Paātrinājums līdz 50 mm / h norāda uz ķermeņa aizsargspēju mobilizāciju, lai cīnītos ar iekaisuma procesu.

Bērnam slimības sākuma stadija bieži rodas bez acīmredzamiem simptomiem, vai ARVI maskē.

Izmaiņas atkarībā no slimības stadijas

Vai ir iespējams droši noteikt tuberkulozes koncentrāciju klātbūtnē, izmantojot laboratorijas asins analīzes? Diemžēl nav. Pilna tuberkulozes asins analīze spēj noteikt iekaisuma procesu tikai noteiktos slimības posmos.

  1. Infiltrācijas stadijā leikocīti nedaudz reaģē, un ESR palielinās.
  2. Sadalīšanās stadijā parādās izteiktas izmaiņas leikocītu formā un eritrocītos.
  3. Izdalītajā formā analīzes laikā tiks izteiktas augstāk minētās novirzes.
  4. Kad iekaisuma process samazinās vai atjaunošanās process, sarkanā asiņa atgriežas normālā stāvoklī, tiek atjaunots leikocītu skaits un attiecība.
  5. Vispārēja asins analīze nekonstatē neaktīvu plaušu tuberkulozes formu.

Iepriekšēja tuberkulozes noteikšana ir priekšnoteikums veiksmīgai ārstēšanai, un pilnīga asins analīze ir metode, kas ļauj laikus atklāt latento iekaisuma procesu. Lai gan analīze netiek uzskatīta par specializētu pētījumu metodi, īsā laikā ir iespējams aptvert lielu cilvēku skaitu. Konstatētā anomālijas noteikšanas gadījumā klīniskajā attēlā ir noteikta tuberkulozes un fluorogrāfijas specifiska analīze.

Kas teica, ka nav iespējams izārstēt tuberkulozi?

Jums ir diagnosticēta tuberkuloze. Jūs izpildāt visas ārsta receptes, bet nav atlabšanas. Neliela tablete sāpinās vēderā, turpina vājumu un apātiju? Varbūt jums vajadzētu mainīt pieeju ārstēšanai.

Ārsti nevar pārvarēt jūsu slimības galveno cēloni. Lasiet stāstu par Helenu, kurai izdevās uzveikt tuberkulozi. Lasīt rakstu >>

ESR rādītāji tuberkulozes gadījumā

Pašlaik saskaņā ar statistiku, tuberkuloze ir visbiežāk sastopamā slimība cilvēku vidū. Visbiežāk šī slimība skar bērnus un nabadzīgos. Ir vērts atzīmēt, ka katru gadu slimnieku skaits divkāršo. Šajā sakarā tiek izstrādātas jaunas zāles un metodes tuberkulozes ārstēšanai.

Galvenais faktors, kas veicina tuberkulozes attīstību, ir imunitātes samazināšanās, ko var izraisīt vides piesārņojums. Ar šo testu palīdzību ir iespējams diagnosticēt šo slimību un daudzos citos veidos.

Tuberkulozes asins analīze ir galvenais indikators cilvēka slimības noteikšanai. Tuberkuloze ir bīstama infekcijas slimība. Ir vērts atzīmēt, ka slimības progresīvākajā stadijā ir ļoti grūti ārstēt, tāpēc ir ļoti svarīgi laikus pamanīt slimību un sākt atbilstošu ārstēšanu slimnīcā.

Tuberkulozes saslimšanas veidi

Slimim ir gaisa transmisijas mehānisms. Tādējādi infekcija var rasties, pateicoties patogēna ievadīšanai organismā caur gļotādu. Turklāt tuberkuloze var tikt pārnēsta no slimības mātes uz attīstības augli.

Gandrīz visos gadījumos tuberkuloze ietekmē elpošanas sistēmu. Atdaliet slimības ārpuslīnijas formu (ietekmē gremošanas sistēmu, centrālo nervu sistēmu, traucē redzes funkciju, locītavām, uroģenitālo sistēmu).

Galvenais slimības avots ir mycobacterium - Koch's zizlis. Tas ietekmē plaušas, ādu, kaulus un daudzus citus orgānus. Parasti tuberkuloze var izraisīt invaliditāti vai pat nāvi. Tomēr, ja slimība tiek diagnosticēta pēc iespējas ātrāk, tad tā ir diezgan labi ārstējama.

ESR rādītāji tuberkulozes gadījumā

Asins analīze tuberkulozes noteikšanai parāda iekaisuma procesa klīnisko gaitu. Parasti eritrocītu sedimentācijas ātrums ir: vīriešiem, 1-10 mm / h, sievietēm, 2-15 mm / h.

Patogēns, kas nonāk cilvēka ķermenī, izraisa bojājumus dažādu sistēmu audos un orgānos. Ieskaitot izmaiņas asinskaitēs. Tātad, kad tiek inficēts ar nūju, eritrocītu sedimentācijas ātrums ir ļoti spēcīgs. Leikocītu skaits palielinās, jo ķermenim ir iekaisuma process.
Parasti tuberkuloze neizraisa nozīmīgas sarkano asins šūnu pārmaiņas. Nelielas anēmijas un zemā hemoglobīna līmeņa attīstība var attīstīties tikai ar ievērojamu asins zudumu. Tādējādi tuberkulozi kopā ar ESR pārsniegumu ievērojami pārsniedz normālo vērtību.

Simptomi

Galvenie tuberkulozes simptomi ir:

  1. Drudzis;
  2. Nakts svīšana;
  3. Elpas trūkuma izskats;
  4. Sauss, stiprs klepus ar krēpu (var būt asinsrites);
  5. Vispārējā nogurums;
  6. Dramatiska svara zudums;
  7. Ātrs nogurums;
  8. Letarģija;
  9. Agresivitāte;
  10. Apetītes trūkums;
  11. Sāpes krūtīs.

Pretstatā pieaugušajiem bērni visvairāk ir pakļauti tuberkulozei. Tādēļ ir nepieciešams regulāri pārbaudīt savu bērnu un veikt pārbaudi, lai identificētu Koch spieķi. Savlaicīga diagnostika ļauj sasniegt pozitīvu rezultātu bez nopietnām sekām.

Dažiem cilvēkiem ir spēcīga imūnsistēma. Šajā gadījumā slimības simptomi sāk parādīties tikai vēlākajos posmos. Ja imunitāte ir novājināta, simptomi parādās slimības sākumā.
Tuberkuloze attīstās lēni un pakāpeniski:

  • Primārā forma.
    Attīstās tūlīt pēc infekcijas. Galvenie simptomi šajā stadijā ir limfmezglu pietūkums.
  • Latentēta (latenta forma).
    Slimības sākumu raksturo simptomu trūkums. Turklāt tie parādās kā īpašas sāpes, kad elpošana un klepus, apetītes trūkums, pastiprināta svīšana un ātrs nogurums. Šo veidlapu var uzskatīt par neinfekciozu.
  • Atvērtā forma.
    Visnopietnākā slimības forma. Ārstēšanai nepieciešams aizsargāt slimu cilvēku no citiem slēgtajās medicīnas iestādēs. Tas ir, lai nodrošinātu apkārtējo cilvēku drošību.
  • Sekundārā forma.
    Novērojams atkārtotas infekcijas rezultātā.

Tuberkulozes diagnostika

Slimības noteikšana ir sarežģīta ar pirmo simptomu līdzību ar hronisku bronhītu. Galvenā loma tuberkulozes diagnostikā ir savlaicīga testu veikšana no potenciālajiem pacientiem. Tātad, ja ir aizdomas, ka pacientam ir tuberkuloze, tiek veikts pētījums par krēpēm. Lai to izdarītu, dienas laikā tiek savākta krūtiņa un nosūta laboratorijā, lai noteiktu mikobaktērijas.

Jāatzīmē, ka tuberkulozes diagnostikai ir citas metodes pacientu izmeklēšanai.

Visefektīvākie slimības diagnozes veidi ir šādi:

  1. B / x asins analīze;
  2. Urīna analīze;
  3. Krēpu analīze;
  4. Mantou tests, Pirque;
  5. CT (datortomogrāfija);
  6. Seroloģiskie asins analīzes (ELISA, PCR);
  7. Bronhoskopija;
  8. Biopsija;
  9. Pleiras punkcija;
  10. Fluorogrāfija;
  11. Rentgenoskopija.

Ir vērts atzīmēt, ka tuberkuloze tiek papildināta ar holesterīna, lizocīma, urīnskābes un Cu koncentrācijas palielināšanos asins serumā. Pamatojoties uz to, visas tuberkulozes pārmaiņas var būt ļoti specifiskas.

Katra slimības forma, protams, atšķiras, smagums, diagnoze un ārstēšana. Tādēļ, parādoties pirmajiem simptomiem, nekavējoties jākonsultējas ar ārstu un neveicat pašnāvību. Tā kā situācija var pasliktināt un pasliktināt stāvokli.

Šobrīd ir daudz zāļu, kas efektīvi cīnās pret tuberkulozes izraisītāju. Personas atjaunošanās vadošo lomu nodrošina savlaicīga diagnostika un kompetentā terapija. Arī pacienta vispārējais stāvoklis ir atkarīgs no atveseļošanās procesa pēc slimības. Tādējādi, ja jūs ievērosit visus medicīniskos ieteikumus, jūs varat samazināt atkārtotas infekcijas risku.

Tuberkulozes laboratoriskā diagnostika

Tuberkuloze ir slimība, kuru ir viegli diagnosticēt pašreizējos apstākļos un zinātnes sasniegumos. Laboratoriska tuberkulozes diagnostika ir galvenā nozīme citās diagnostikas metodēs, otrkārt, tikai ar rentgena metodēm.

CBC

Pacientiem ar tuberkulozi vispārējā asins analīzes izmaiņas nav patognomoniskas. Ar ierobežotu un neaktīvu tuberkulozes formu eritrocītu hipohromija ir raksturīga normālam skaitlim. Ar masveida infiltrāciju vai kazeozo pneimoniju, ar plaši izplatītu kazeozu limfadenītu, tiek konstatēti specifiski zarnas bojājumi, kā arī ar plaušu vai pēcoperācijas asiņošanu, eritropēniju un mikrocitozi, oligohromāzi un polikhromāzi. Makrocytoze un vēl jo vairāk poikilicitoze ir daudz retāk, parasti ar smagu anēmiju. Retikulocītu skaits ar kompensētu tuberkulozes stadiju svārstās no 0,1 līdz 0,6%, ar subcompensāciju - no 0,6 līdz 1,0%, un 1% retikulocītu ir raksturīgi dekompensācijai.

Tuberkulozes gadījumos dažos gadījumos var novērot mērenu leikocitozi (līdz 15 tūkst. Leikocītu), retāk leikopēniju, kas konstatēta 2-7% gadījumu pacientiem ar ierobežotām un viegli procesa formām un 12,5% - destruktīvā un progresējošā plaušu tuberkulozes gadījumā..

Visbiežāk pārmaiņas rodas leikocītu formā. Tiek novērota gan relatīva, gan absolūta neitrofilija, mēreni leikocītu pārvietošanās pa kreisi līdz promielocītiem. Mielocītus ļoti reti sastopas nekomplicētas tuberkulozes gadījumā. Neitrofilu skaita pieaugums tuberkulozes pacienta hemogramā ar patoloģisku granulētumu vienmēr norāda uz procesa ilgumu: pacientiem ar smagu tuberkulozi gandrīz visi neitrofīli satur patoloģisku granulāciju. Kad tuberkulozais uzliesmojums samazinās, kodolmaiņas normalizēšanās notiek relatīvi ātri. Neitrofilu patoloģiska granulārā viela parasti ilgst ilgāk nekā citas izmaiņas hemogramā.

Eozinofilu saturs perifērā asinīs mainās atkarībā no procesa fāzes un ķermeņa alerģiskā stāvokļa. Viņu skaits smagos un ilgstošos slimības uzliesmojumos samazinās līdz pat aneozinofilijai, un, gluži pretēji, palielinās ar infiltrāciju un pleiras izsvīduma rezorbciju, kā arī ar agrīnām primārās tuberkulozes formām.

Lielākajai daļai primārās tuberkulozes formas ir pievienota limfopēnija, kas dažreiz tiek novērota vairākus gadus, pat pēc īpašām izmaiņām rētas. Sekundāro tuberkulozi akūtā fāzē atkarībā no procesa smaguma var būt vai nu normāls limfocītu skaits vai limfopēnija.

Starp tuberkulozes procesa novērtēšanas testiem īpaša vieta ir eritrocītu sedimentācijas ātruma (ESR) noteikšana, kas ir svarīga tuberkulozes procesa gaitas novērtēšanā un tās aktīvo formu noteikšanā. ESR palielināšanās liecina par patoloģiskā procesa (infekciozi-iekaisuma, gļotādas, septiskas, hemoblastozes, Hodžkina slimības utt.) Klātbūtni, un tā kalpo kā tās smaguma indikators, tomēr parasto ESR rādītāji ne vienmēr norāda uz patoloģijas trūkumu. Eritrocītu sedimentāciju paātrina globulīnu, fibrinogēna, holesterīna un asins viskozitātes līmeņa pazemināšanās. Eiritrocītu sedimentācijas palēnināšana ir raksturīga apstākļiem, kas saistīti ar hemokoncentrāciju, albumīna un žultsskābju satura palielināšanos.

Hemogramma pacientiem ar tuberkulozes izmaiņām ārstēšanas laikā. Hematoloģiskās izmaiņas pazūd ātrāk, jo veiksmīgāka terapeitiska iejaukšanās. Tomēr jāpatur prātā ietekme uz dažādu antibakteriālo līdzekļu hematopoēzi. Tie bieži izraisa eozinofiliju, dažos gadījumos - leikocitozi un biežāk leikopēniju līdz agranulocitozei un limfoīdus un retikulāras reakcijas. Sistemātiska hematoloģiskā kontrole un iegūto datu pareiza analīze ir būtiski, lai novērtētu pacienta klīnisko stāvokli, procesa dinamiku un piemērotās ārstēšanas efektivitāti.

Urīna analīze

Ar urīna sistēmas tuberkulozi urīna analīze ir galvenā laboratorijas diagnostikas metode. Jūs varat novērot leikocituriju, eritrocituriju, proteīnūriju, hipoizostenuriju, mikobaktēriju tuberkulozi, nespecifisku bakteriūriju.

Leikociturija ir visbiežākais urīnskābes sistēmas tuberkulozes simptoms pirms īpašas ķīmijterapijas, un tā nav tikai izņēmuma gadījumos, piemēram, ar pilnīgu urīnvada vēdera iztukšošanu. Nechiporenko tests (leikocītu skaita noteikšana 1 ml urīnā) palīdz objektīvāk novērtēt leikociturijas pakāpi nefrotuberkulozes gadījumā un dažos gadījumos to identificēt normālā urīna analīzē. Tomēr jāpatur prātā, ka leikocitūrijai var būt akūts un hronisks pielonefrīts, cistīts, uretrīts, akmeņi nierēs un urīnpūsli.

Eritrocitrija kā leikociturija. To uzskata par vienu no biežākajām olnīcu sistēmas tuberkulozes laboratoriskajām pazīmēm. Hematūrijas biežums ir atkarīgs no procesa izplatības, tas palielinās ar destruktīvā tuberkulozā procesa attīstību nierēs. Eritrokiturija bez leikociturijas ir raksturīga nieru tuberkulozes agrīnajai stadijai. Hematūrija, kas pārsniedz leikocituriju, ir svarīgs arguments nieru tuberkulozes labā, diferencējot to ar nespecifisku pielonefrītu.

Bioķīmiskais asins analīzes

Tuberkulozes gadījumā dažu bioķīmisko parametru izmaiņas galvenokārt ir atkarīgas no procesa fāzes, sarežģījumiem un dažādām vienlaicīgām slimībām. Pacientiem ar neaktīvu plaušu un citu orgānu tuberkulozi kopējā asins seruma olbaltumvielu un olbaltumvielu frakcija nav mainījusies un nosaka to normālo saturu.

Akūtas slimības formās, kā arī hronisku tuberkulozes formu saasināšanās un progresēšanas laikā samazinās albumīna-globulīna koeficients.

Būtiska nozīme, novērtējot aknu funkcionālo stāvokli un organiskos bojājumus tuberkulozes un tā komplikāciju gadījumā, ir tiešā un kopējā bilirubīna, aspartātaminotransferāzes (ACT), alanīna aminotransferāzes (ALT) noteikšana serumā. Aminotransferāžu līmeņa dinamiskā noteikšana. bilirubīna ārstēšanai pacientiem ar tuberkulozi, īpaši smagas formas, ir obligāta sastāvdaļa tuberkulozes slimnieku bioķīmiskajā pārbaudē, un to veic katru mēnesi.

Nieru funkcionālā stāvokļa novērtējums ietver kreatinīna līmeņa noteikšanu serumā un glomerulārās filtrācijas ātruma aprēķināšanu, izmantojot Cockroft-Gault formulu. Glomerulārās filtrācijas ātruma aprēķins, izmantojot Reberg testu, dod mazāk precīzus rezultātus.

Galvenais pacientu ar tuberkulozes dinamisko bioķīmisko pētījumu mērķis ir kontrolēt procesa gaitu, savlaicīgi noteikt zāļu blakusparādības un atbilstošu homeostāzes traucējumu korekciju.

Bioķīmisko pētījumu metožu izmantošana ārpuslīnijas tuberkulozei

Visinformatīvākais rādītājs ņem vērā tuberkulosteariskās skābes saturu bioloģiskajos šķidrumos, bet tās definīcijai ir tehniskas grūtības (nepieciešamība izmantot gāzu hromatogrāfiju un masas spektrometriju).

Daudzsološi ir mērīt adenozīna deamināzes, fermenta, kas tiek konstatēts šķidrumos, aktivitāti: sinoviālā, perikarda, asciķe vai cerebrospināla. Galvenie adenozīna deamināzes ražotāji ir limfocīti un monocīti. Adenozīna deamināzes aktivitātes noteikšana bioloģiskajos šķidrumos veicina tuberkulozes sinovīta, limfmezglu tuberkulozes, tuberkulozā meningīta, tuberkulozes serozīta diagnozi.

Dažu bioķīmisko parametru dēļ to nespecifiskums tiek noteikts tikai bioloģiskajos šķidrumos, kas atrodas tuvu bojājumam. Indikatoru līmeni mēra, reaģējot uz tuberkulīna ievadīšanu zemādā vai iekšķīgi (parasti pirms ievadīšanas un pēc 48 un 72 stundām). Pēc tam tiek aprēķināts marķiera līmeņa pieauguma pakāpe (%) salīdzinājumā ar sākotnējo līmeni.

Organiska tipa feramīda transamidīnāzes darbības optimāla noteikšana urīnā, kuras parādīšanos konstatē ar dažāda rakstura nieru bojājumiem. Transaminidāzes pētījums ir pamatots tikai tuberkulīna subkutānas ievadīšanas apstākļos, lai pastiprinātu vietējo iekaisuma procesu. Transamidāzes aktivitāte urīnā tiek noteikta sākumstāvoklī un 24-72 stundas pēc tuberkulīna 50 TE ievadīšanas. Fermentūrijas palielināšanās 2 reizes un vairāk ļauj 82% gadījumu atšķirt nieru aktīvo tuberkulozi no hroniska pielonefrīta saasināšanās.

Sieviešu dzimumorgānu tuberkulozes gadījumā provokatīvā tuberkulīna testā nosaka haptoglobīna un malondialdehīda koncentrāciju asinīs. Tuberkilīnu ievada subkutāni 50 TE devā, un pēc 72 stundām tiek veikts atkārtotais bioķīmiskais pētījums. Tuberkulozes etioloģijas gadījumā haptoglobīna līmeņa paaugstināšanās pakāpe ir vismaz 28%, malonialdehīda līmenis - 39% vai vairāk. Lieto arī, lai noteiktu adenozīna deamināzes aktivitāti peritoneālajā šķidrumā, kas iegūts no Douglasa kosmosa. Punktuāls tiek atkārtoti pārbaudīts 72 stundas pēc intradermālas tuberkulīna ievadīšanas 0,1 TE un 0,01 TE devu iekšējo dzimumorgānu projekcijas rajonā priekšējās vēdera sienās. Par labu tuberkulozajam procesam adenozīna deamināzes aktivitātes pieaugums par 10% vai vairāk, salīdzinot ar sākotnējo, ir indikatīvs.

Ar acu bojājumu tiek pārbaudīta fokālās reakcija, kas notiek acī, reaģējot uz antigēnu stimulāciju. Tajā pašā laikā vērojama izteikta reakcijas nevēlama attīstība kopā ar redzes funkciju samazināšanos. Tā kā bieži ir grūti novērtēt minimālās fokālās reakcijas, lai objektīvi izdarītu secinājumu, ieteicams paralēli koncentrēties uz seruma haptoglobīna vai adenozīna deamināzes līmeņa paaugstināšanos.

Visi bioķīmiskie pētījumi jāveic kopā ar citām metodēm.

Asins koagulācijas tests

Relevance pētījuma statusa asins recēšanas sistēmā TB izraisa klātbūtni skaitam pacientu ar plaušu tuberkulozi spļaušana vai plaušu asiņošanu, kā arī hemocoagulation komplikācijas ķirurģiskas tuberkulozes ārstēšanā. Turklāt latentā intravaskulāra hemokoagulācija, kas dabiski saistās ar tuberkulozi, ietekmē slimības gaitu un ķīmijterapijas efektivitāti.

Pacientiem ar plaušu tuberkulozi, kam pārsvarā ir eksudatīvā iekaisuma sastāvdaļa, novērota asins antikoagulanta aktivitātes samazināšanās. Pacientiem ar zemu specifisku plaušu bojājumu plaušās, kuru prevalence ir produktīvā iekaisuma sastāvdaļa, intravaskulāra hemokoagulācija nav ļoti izteikta. Pacientiem ar plaušu tuberkulozi ar hemoptysis un plaušu asiņošana valsts asins recēšanas sistēmā ir atšķirīga: pacientiem ar zemu asins zudumu pie augstumā gemoptoe vai uzreiz pēc tā izbeigšanas ir krasi palielinās asins recēšanas spēju dēļ smagu intensifikāciju trombinoobrazovaniya saglabājot palielinātu "strukturālā" recēšanu. Pacientiem ar lielu asins zudumu fibrinogēna koncentrācijas samazināšanās dēļ tiek novērota koagulācijas potenciāla samazināšanās. XIII faktora aktivitāte, trombocītu skaits. Ķirurģiskas ārstēšanas stadijā pacientiem ar ierobežotām plaušu tuberkulozes formām nav būtisku traucējumu ar homeostāzes sistēmu. Pacientiem ar kopīgiem procesiem, veicot pneimoniju vai pleuropneumonektomiju, bieži attīstās DIC, kas var būt "otrā slimība".

Lai uzraudzītu stāvokli asinsreces pacientiem ar plaušu tuberkulozi jāveic noteikšanu aktivētā parciālā tromboplastīna laiks (APTL), fibrinogēns, trombīna laiku, protrombīna indekss asiņošanas laiku un recēšanas laiku.

Hormonālie pētījumi

Mūsdienu eksperimentālie un klīniskie novērojumi liecina par specifiskas plaušu pneimonijas hormonālas izmaiņas pārmaiņām. Ir pierādīts, ka hipofīzes-virsnieru, hipofīzes-vairogdziedzera sistēmu un aizkuņģa dziedzera funkciju disfunkcijas korekcija kopā ar anti-tuberkulozes terapiju veicina fibrogēzes procesu aktivizēšanu un specifiskā iekaisuma fokusēšanu.

Hipofīzes-vairogdziedzera sistēmas funkcionālo stāvokli vērtē pēc trijodtironīna (T3), tiroksīns (T.4), vairogdziedzera stimulējošā hormona hipofīze (TSH). Ir konstatēts, ka subklīnisko hipotireozi konstatē 38-45% pacientu ar plaušu tuberkulozi, un to visbiežāk diagnosticē izplatīšanās un šķiedru-kaļķakmens procesa formas. Saskaņā ar tādām pašām formām, piemēram, T līmenis ir visvairāk krasi samazināts.3,tā un t4, un tur rodas šo hormonu nelīdzsvarotība, palielinot attiecību T4/ Ts.

Antinožu korķa funkciju novērtē kortisola līmenis asins serumā un aizkuņģa dziedzera endokrīnā funkcija pēc imūnreaktīvā insulīna koncentrācijas. Infekcijas slimības akūtā fāzē palielinās nepieciešamība pēc endogēnā kortizola un insulīna. Hiperinsulinēmija norāda arī uz ķermeņa audu rezistenci pret insulīnu, kas ir raksturīgs jebkuram aktīvajam iekaisuma procesam, jo ​​īpaši specifiskam. Vairumā pacientu konstatē hiperkortikuma klātbūtnes noteikšanu ar aktīvo plaušu tuberkulozes virsnieru dziedzera glikokortikoīdu funkciju. Normāls līmenis kortizola koncentrācijas asinīs, kas pacientam ar infekciozo iekaisumu akūtā periodā ir jāuzskata par relatīvo neveiksmi glikokortikoīdu funkciju virsnieru garozas, kas var kalpot par pamatu, kam devām atbilstošu aizvietošanas terapiju ar glikokortikoīdiem.

Gandrīz trešdaļa pacientu ar plaušu tuberkulozi var konstatēt, ka viņu insulīnmīnijas līmenis ir diezgan zems un tuvojas normas apakšējai robežai, bet 13-20% - ievērojamu hiperinsulinizmu. Gan relatīvā hipo-un hiperinsulinizācija ir augsta riska faktori dažāda smaguma pakāpes ogļhidrātu metabolisma traucējumu attīstībai. Šīs izmaiņas aizkuņģa dziedzera B šūnu funkcionālajā aktivitātē pieprasa regulāru glikēmijas kontroli pacientiem ar tuberkulozi un savlaicīgu diabēta profilaksi. Papildus Tas kalpo kā papildu pamatojums insulīna fizioloģisko devu lietošanai kompleksajā tuberkulozes terapijā.

Parasti pacientiem ar smagu tuberkulozi, ar plašu plaušu bojājumiem un smagiem tuberkulozes intoksikācijas simptomiem visizplatītākie ir vairogdziedzera hormonu līmeņa samazināšanās, to nelīdzsvarotība, hiperkortizolemija un hiperinsulinisms.

Tuberkulozes mikrobioloģiskā diagnostika

Mikrobioloģiskie pētījumi ir nepieciešami, lai identificētu pacientus ar tuberkulozi, pārbaudītu diagnozi, pārraudzītu un koriģētu ķīmijterapiju, novērtējot ārstēšanas rezultātus, citiem vārdiem sakot, sākot no tuberkulozes pacienta reģistrācijas brīža līdz izņemšanai no reģistra.

Visas epidemioloģiskās programmas un projekti pamatojas uz baktēriju ekskrementu skaita novērtējumu, ko nevar izdarīt, neizmantojot laboratorijas metodes, lai noteiktu mikobaktēriju tuberkulozi. Pārbaudot tā dēvēto neorganizēto iedzīvotāju mainīgumu, baktēriju ekskrementu saturs sasniedz 70 vai vairāk, kas padara laboratorijas metodes par diezgan efektīvu līdzekli, lai identificētu pacientus ar tuberkulozi šīs populācijas grupas vidū.

Tradicionālās mikrobioloģiskās metodes tuberkulozes diagnostikai - bakterioskopiskās un kultūras studijas. Mūsdienu metodes apsver mikobaktēriju tuberkulozes audzēšanu automatizētās sistēmās, PCR. Tomēr visas šīs metodes obligāti tiek apvienotas ar klasiskajām bakterioloģiskajām metodēm.

Diagnostikas materiāla savākšana

Laboratorijas pētījumu efektivitāte lielā mērā ir atkarīga no diagnostikas materiāla kvalitātes. Atbilstība noteikumiem par diagnostikas materiāla savākšanu, uzglabāšanu un transportēšanu, kā arī precīzs algoritma īstenošana pacientu izmeklēšanā tieši ietekmē rezultātu un nodrošina bioloģisko drošību.

Pētījumos par tuberkulozi, izmantojot dažādus materiālus. Sakarā ar to, ka TB logkih- visizplatītākais tuberkulozes bojājumi pamatmateriālu pētniecības uzskatīt gļotas un veic cita veida noņemamu tracheobronchial: augšējo elpceļu sekrēti, kas iegūtas pēc aerosola ieelpošanas: bronhu skalojot; bronhu alveolāru lavāžas; materiāls, kas iegūts ar bronhoskopiju, transtrakhāļu un intrapulmonārā biopsija: aspirāts no bronhiem, balsenes uztriepes, eksudāti, uztriepes no brūcēm utt.

Pētniecības efektivitāte palielinās, ja viņi kontrolē pacienta materiālu kopumu. Lai to izdarītu, piešķiriet speciāli aprīkotu telpu vai iegādājieties īpašas kajītes. Materiālu savākšana ir bīstama procedūra, tāpēc jums ir nepieciešams savākt materiālus pētījumiem, ievērojot infekciozā drošuma noteikumus.

Materiāls mikobaktēriju tuberkulozes izpētei tiek savākts sterilos flakonos ar stingri ieskrūvētām vāciņām, lai novērstu vides piesārņošanu un savāktu materiālu no piesārņojuma.

Diagnostikas materiāla savākšanas flakoniem jāatbilst šādām prasībām:

  • jābūt izgatavotam no triecienizturīga materiāla;
  • būtu viegli izkausēt autoklāvā;
  • pietiekamā daudzumā (40-50 ml):
  • ir plaša atvere krēpu vākšanai (diametrs nav mazāks par 30 mm);
  • viegli lietojams, caurspīdīgs vai caurspīdīgs, lai jūs varētu novērtēt savākto paraugu daudzumu un kvalitāti, neatverot vāku.

Lai iegūtu optimālus pētījumu rezultātus, ir jāievēro šādi nosacījumi:

  • materiālu savākšana tiek veikta pirms ķīmijterapijas sākuma;
  • materiāls pētījumam jāsavāc pirms rīta uzņemšanas ar pārtiku un narkotikām;
  • pētījumam ir vēlams savākt vismaz 3 rīta skriemeļa paraugus. Savāc krēpu 3 dienas pēc kārtas;
  • Savāktie materiāli pēc iespējas ātrāk jānogādā laboratorijā:
  • ja materiālu tūlīt nav iespējams nogādāt laboratorijā, to uzglabā ledusskapī gaisa temperatūrā 4 ° C ne ilgāk kā 48 stundas;
  • transportējot materiālu, ir rūpīgi jāuzrauga flakonu integritāte.

Pareizi savāktai krēpai ir gļotādas vai gļoturulants raksturs. Izpētītās krunkuma daļas optimālais tilpums ir 3-5 ml.

Flegma tiek savākts medicīnas speciālista uzraudzībā. Personas, kas ir atbildīgas par krēpu vākšanu, ir jāuzrauga dažu noteikumu izpilde:

  • Pacientei jāpaskaidro pētījuma nolūks un nepieciešamība kleizēt sejas vai nazofaringijas gļotas, bet dziļo elpošanas ceļu saturu. To var panākt pēc produktīvā klepus, kas rodas pēc dažām (2-3) dziļām elpām. Ir arī nepieciešams brīdināt pacientu, ka viņam vispirms ir jāizskalo mute ar vārītu ūdeni, lai noņemtu galveno veģetatīvās mikrofloras daļu mutes dobumā un pārtikas atliekos, kas kavē pētīt krēpu;
  • medicīnas darbinieks, kas piedalās krēpu krājumā, papildus drēbēm un vāciņam, jāvalkā maska, gumijas cimdi un gumijas priekšauts;
  • stāvot aiz pacienta, ieteicams pudeli turēt pēc iespējas tuvu lūpām un nekavējoties atdalīt krēpu tajā, kad tas klepojas, bet ir jānodrošina, lai gaisa plūsma būtu vērsta pret veselības aprūpes sniedzēju:
  • Pabeidzot krēpu asiņu savākšanu, ārstam ir rūpīgi jāslēdz flakons ar vāciņu un jānovērtē savāktā krēpas daudzums un kvalitāte. Pēc tam pudele tiek marķēta un ievietota īpašā biksē transportēšanai laboratorijā.

Ja pacientam nav ražot gļotas, naktī pirms un agri no rīta, dienā kolekcijas materiāla nepieciešams, lai dotu viņam atkrēpošanas :. izraksts no saknēm zefīrs (mukaltin), bromheksīns, Ambroksols utt - vai piemērot kairinošs ieelpošanas lietojot iekārtu uzstādīta telpā, lai savāktu krēpas Šādā veidā savākto materiālu nevar saglabāt, un to jāpārbauda savākšanas dienā. Lai izvairītos no viņa "noraidīšanas" laboratorijā virzienā vajadzētu izdarīt īpašu atzīmi.

Ja šajā iestādē netiek veikta mikrobioloģiska izpēte, savāktais diagnostikas materiāls centralizēti jānogādā laboratorijā, ievērojot obligātu materiāla saglabāšanu starp piegādēm ledusskapī vai konservantu lietošanu. Piegādājiet materiālu laboratorijā transportēšanas kastēs, kuras var viegli dezinficēt. Katrs paraugs ir jāmarķē ar atbilstošu etiķeti, un visa partija jāaizpilda ar pievienoto veidlapu.

Pacientu pārbaudes veidi un biežums

Sākotnējā, tā dēvētajā diagnostikā, pacienta pārbaude tuberkulozes gadījumā 2 vai 3 dienu laikā ir jāizpēta vismaz 3 krēpas porcijas. ko savāc medicīnas personāla uzraudzībā, kas palielina mikroskopijas efektivitāti.

Primārās tuberkulozes skrīnings jāveic visām veselības aprūpes sistēmas medicīnas diagnostikas institūcijām. Nesen, lai paaugstinātu primārās pārbaudes efektivitāti, pamatojoties uz klīniskās diagnostikas laboratorijām, tika organizēti tā sauktie mikroskopijas centri, kas aprīkoti ar moderniem mikroskopiem un aprīkojumu epidēmijas nodrošināšanai.

TB iekārtās tiek izmantots skrīninga grafiks, kas ietver pētījumu par krēpu vai citu diagnostikas materiālu vismaz 3 reizes 3 dienu laikā. Ārstēšanas laikā mikrobioloģiskie pētījumi tiek veikti regulāri, vismaz reizi mēnesī, intensīvas ķīmijterapijas fāzē. Pārejas periodā pārejas posmā pētījumi tiek veikti retāk - 2-3 mēnešu intervālos, bet pētījuma daudzums ir samazināts līdz diviem.

Diagnozes materiāla savākšanas iespējas ārpuslīnijas tuberkulozes gadījumā

Patoloģiskā materiāla īpatnība tuberkulozes ārpuslīnijas formās ir mazā mycobacterium tuberculosis koncentrācija, kas prasa jutīgākas mikrobioloģiskās izpētes metodes, pirmkārt, barības vielu barošanas metodes.

Urogenitālā tuberkulozē urīns ir visatvērtīgākais izpētes materiāls. Urīna paraugu ņemšanu veic apmācīta medmāsa.

Ārējie dzimumorgāni mazgā ar ziepēm un ūdeni vai vāju kālija permanganāta šķīdumu. Uzmanīgi apstrādājiet urīnizvadkanāla ārējo atveri. Vidēja rīta urīna daļa tiek savākta sterilā flakonā: vīriešiem - dabiski sievietēm - ar katetru. Nieres iegurņa urīns tiek savākts sterilās mēģenēs, lai kateterizētu vienu vai divas nieres, pēdējā gadījumā - obligāti atsevišķi no katra nieres. Nelielu šī urīna daudzumu centrifugē, nogulsnes pārbauda.

Vīriešiem spermu, sēklinieku pūtījumus, prostatas sekrēcijas centrifugē, lai iegūtu nogulsnes. Jebkurā ģenitāliju rajonā vīriešiem lokalizējot konkrētu procesu, prostatas dziedzera masāža var sekmēt sekrēciju izraisošo tuberkulozes mikobaktēriju saturošo sekrēciju veidošanos.

Menstruālo asiņu savāc no sievietēm, izsūknējot vai izmantojot Kafka vāciņu. Iegūtais materiāls tiek atbrīvots no sarkano asins šūnu, mazgājot to ar destilētu ūdeni, pēc tam centrifugējot. Pētījums.

Izlaidumi no dzemdes kakla kanāla tiek savākti jebkurā Kafka traukā vai vāciņā, tas ir, ir vēlams uzkrāties 1-2 ml patoloģijas materiāla.

Materiāls, kas iegūts operācijas laikā uz nierēm, dzimumorgāniem. biopsijas, endometrija lūžņi, homogenizēti. Lai to izdarītu, to ievieto sterilā javai un rūpīgi sasmalcina ar sterilām šķērēm. Iegūto suspensiju pievieno sterilai upju smailei, kas ir vienāda ar tās masu, tad pievieno 0,5-1,0 ml izotoniskā nātrija hlorīda šķīduma, un visu veido, lai izveidotu pastas masu, pievienojot izotoniskā nātrija hlorīda šķīdumu (4-5 ml). Tad masai atļauts apmēram 1-1,5 minūtes, supernatants tiek pārbaudīts.

Kaulu un locītavu tuberkuloze. Punktāts (abscesa abscesu puse), kas iegūts ar sterilu šļirci, tiek ievietots sterilā traukā un nekavējoties nogādāts laboratorijā. Sterilā pipete, kas iepriekš samitrināta ar sterilu izotoniskā nātrija hlorīda šķīdumu, ņem 2-5 ml pusi, pārnes to pudelē ar krellēm un pievieno vēl 2-3 ml izotoniskā nātrija hlorīda šķīduma. Pudele ir aizvērta ar aizbāzni un sakrata 8-10 minūšu laikā. Pārbauda homogenizēto vircu.

For fistulous osteo-articular tuberkuloze formas, puse tiek ņemta no fistulas. Pareiza novadīšana tiek savākta tieši caurulītē. Neliela izlieci ar izliekumu, fistulu mazgā ar sterilu nātrija hlorīda izotonisko šķīdumu, un pārbaudei tiek nosūtīti testa mēģenē savāktie mazgāšanas ūdeņi vai tamponā samitrināts gabals.

Ķirurģiskie materiāli, kas iegūti ķirurģijā uz kauliem un locītavām, var sastāvēt no gūžas-nekrotiskās masas, granulācijas, rētas, kaulu audiem, sinoviālo membrānu audiem un citiem substrātiem. To apstrādā kā ar nieru tuberkulozi.

Sinovilārā šķidruma mikrobioloģiskā pārbaude 3% nātrija citrāta šķīdumā (1: 1 attiecība), lai novērstu asinsizplūdumu, tiek veikta tieši pēc punkcijas.

Limfmezglu tuberkuloze. Pārbaudīts arī limfmezglu punkcijas laikā iegūtā puse. kā zarnu abscesu pusē. Operācijas laikā iegūtie limfmezglu audi, biopsijas tiek pārbaudītas tāpat kā citos tuberkulozes veidos.

Izmēģinot fekāliju masas pret mycobacterium tuberculosis, ir ārkārtīgi reti, jo gandrīz pilnīgi nav pozitīvu rezultātu.

Mikroskopijas mikobaktērijas

Mikroķirurģija krēpās ir salīdzinoši ātra, vienkārša un lēta metode, kas jāizmanto visos aizdomās tuberkulozes gadījumos. Turklāt šis pētījums tiek veikts, lai novērtētu ķīmijterapijas efektivitāti un noteiktu atgūšanu vai neveiksmīgu ārstēšanas iznākumu bez kultūras rezultātiem.

Izmanto divas mikroskopiskās pārbaudes metodes:

  • tiešā mikroskopijas metode, ja uztriepi sagatavo tieši no diagnostikas materiāla;
  • nogulumu mikroskopijas metode, kas sagatavota no dezaktivēta materiāla kultūrai.

Pirmo metodi izmanto laboratorijās, kurās veic tikai mikroskopiskos izmeklējumus (vispārējā medicīnas tīkla klīniskās diagnostikas laboratorijas).

Labākos mikroskopiskās pārbaudes rezultātus iegūst, koncentrējot diagnostikas materiālu (piemēram, ar centrifugēšanu).

Lai konstatētu mikobaktēriju tuberkulozi ar 50% mikroskopijas iespējamību, 1 ml krēpas satur vairāk nekā 5000 mikrobu šūnas. Pacientiem ar plaušu tuberkulozes formām parasti ir ievērojama daudzums skābā izturīgu baktēriju, kas ļauj viņiem pārliecinoši identificēt tos bakterioskopijas laikā. Šīs metodes diagnostisko jutīgumu var uzlabot, pētot vairākus viena pacienta krēpu paraugus. Negatīvā bakterioskopija neizslēdz tuberkulozes diagnozi, jo dažu pacientu krēpās ir mazāk mikobaktēriju, nekā to var noteikt ar mikroskopiju. Nepareiza krēpu uzkrāšanās var būt arī negatīvas bakterioskopiskās izmeklēšanas cēlonis.

Visbiežāk sastopamā metode skābju ātras mikobaktēriju noteikšanai uztriepes laikā ir krāsošana saskaņā ar Ziehl-Nelsen. Metode ir balstīta uz karboliskā fuksīna iekļūšanu mikrobālas šūnās caur membrānu, kurā ietilpst vaska un lipīdu slānis, vienlaikus veicot siltumu un spēcīgu fenola kodināšanas efektu. Pēc tam uztriepes krāsas izmaiņas ar 25% sērskābes vai 3% sālsskābes šķīdumu izraisa krāsas izmaiņas visām ar skābi nesaturošām struktūrām. Balinātas izplūšanas detaļas iekrāso ar 0,3% metilēnzilā šķīdumu. Mikobaktērijas neuztver parastās anilīna krāsvielas, kā rezultātā skābes izturīgas mikobakterijas krāsotas aveņu sarkanā krāsā un citos mikrobos un šūnu elementos - zilā krāsā.

Lai pārbaudītu ar Zilu-Nelsen krāsotu uztriepes, tiek izmantots gaismas binokulārs mikroskops ar iegremdēšanas mērķi (90 vai 100 reizes palielinājums) un okulārs ar 7 vai 10 reizes lielāku palielinājumu. Pārbaudiet 100 redzes laukus, kas ir pietiekami, lai identificētu atsevišķas mikobaktērijas uztriepes. Gadījumā, ja šāda pētījuma rezultāts ir negatīvs, ir vēlams apskatīt vēl 200 skatījumu laukus, lai to apstiprinātu. Ierakstīt rezultātus, norādot konstatēto skābes izturīgo mikobaktēriju (CUM) skaitu.

Papildus šai tehnikai fluorescenti tiek izmantoti luminiscences mikroskopijai, kas ļauj sasniegt labākos rezultātus. Šīs metodes izmantošana palielina mikroskopijas efektivitāti par 10-15%. Mikobaktēriju ārstējot ar luminiscējošām krāsvielām (auramīnu, rodamīnu utt.), Šīs vielas ir saistītas arī ar vasku līdzīgām mikrobu šūnu struktūrām. Kad krāsotais šūna ir apstarota ar aizraujošu gaismas avotu (noteiktu ultravioletā starojuma spektru), tie sāk mirgot oranžā vai spilgti sarkanā gaismā pret melnu vai tumši zaļu fonu. Sakarā ar redzamā attēla lielo spilgtumu un kontrastu, mikroskopu kopējo palielinājumu var samazināt par 4-10 reizēm, kas paplašina redzamības lauku un samazina sagatavošanās laiku. Līdz ar to, pateicoties daudz plašākam lauka dziļumam, ir iespējams palielināt pētījuma komfortu.

Izmantojot fluorescences mikroskopiju, tas aizņem ievērojami mazāk laika, lai aplūkotu to pašu uztriepes laukumu, nekā ar Tsil-Nelsen krāsotu uztriepes mikroskopu. Ja darba dienas laikā mikroskopētājs apmeklē aptuveni 20-25 tādas uztriepes, tad, izmantojot fluorescences mikroskopiju, tajā pašā laikā viņš var pārbaudīt vairāk nekā 60-80 paraugu. Pieredzējuši mikroskopi zina, ka šūnu krāsošana ar auramīna un rodamīna maisījumu zināmā mērā ir raksturīga skābēm izturīgām mikobaktērijām, kurām šajā gadījumā ir zelta spieķi. Saprofīti ir zaļgani nokrāsoti.

Vēl viena būtiska priekšrocība metodi dienasgaismas mikroskopu - spēju atklāt izmainīta Mycobacterium zaudēja reibumā nelabvēlīgiem faktoriem, tai skaitā intensīvā ķīmijterapija, kislotousotoychivosti īpašums un netiek konstatēta saistībā ar šo krāsošanu Ziehl-Nelsenu.

Fluorescences mikroskopijas trūkumi ietver mikroskopa salīdzinoši augstās izmaksas un tā darbību. Tomēr centralizētās vai citās lielās laboratorijās, kur slodze pārsniedz 3 tehniķu skaitu, kuri strādā ar trim tradicionālajiem mikroskopiem, tā vietā ir lētāk izmantot vienu fluorescences mikroskopu.

Bakterioskopiskām metodēm ir diezgan augsta specifika (89-100%). Aptuveni 97% pozitīvu rezultātu, kas iegūti ar jebkuru mikroskopijas metodi, nepārprotami apstiprina sēšanas rezultāti.

Jāatzīmē, ka patoloģiska materiāla uztriepes mikroskopiskā pārbaude nevar noteikt identificēto skābes izturīgo mikobaktēriju sugu. mikroskopija metode ļauj sniegt atzinumu tikai par esamību vai neesamību skābes sagatavošanā mikroorganismu, ko var izskaidrot ar to, ka pastāv dabā ar lielu skaitu morfoloģiski līdzīgas tuberkulozes mikobaktēriju sarežģītu nontubercular skābes izturīgs mikroorganismiem.

Semikvivalentu vienību ražotās mikroskopijas rezultātu novērtēšana.

Lai varētu salīdzināt dažādu mikroskopijas metožu rezultātus, tiek ieviesti empīriskie koeficienti. Piemēram, lai salīdzinātu ar uztriepes iezīmētajiem ar luminiscences krāsām rezultātus, dati pētījums gaismas mikroskopu (1000 reižu palielinājumu), tas ir nepieciešams, lai sadalīt skaitu acid-fast nūjiņām konstatējusi fluorescences mikroskopu, atbilstošais koeficients pie 250-kārtīgu palielinājumu - līdz 10., 450 reizes - 4, ar 630 reizes - 2.

Mikroskopijas iezīmes ārkārtas tuberkulozes gadījumā

Tiešā mikroskopija tiek veikta, kā arī pēc bagātināšanas sagatavota uztriepe mikroskopā, kam seko Zill-Nelsen krāsošana vai luminiscējošas krāsvielas. Tiešā mikroskopija ar smidzināšanu ir neefektīva, jo materiālā ir neliela mikobaktēriju koncentrācija, tāpēc ir lietderīgāk izmantot bagātināšanas metodes. Centrifugēšana ir visefektīvākā. Ja bioloģiskais materiāls ir viskozs, tiek veikta centrifugēšana, vienlaikus homogenizējot un sašķidrinot materiālu, ko veic, izmantojot ātrbapīda centrifūgas ar centrālo spēku 3000 g un hipohlorīta šķīdumus. Citas bagātināšanas metodes, piemēram, mikroflota, pašlaik netiek izmantotas bioloģiski bīstamu aerosolu veidošanās dēļ.

Kultūras metode tuberkulozes diagnosticēšanai

Sēšanas metode vai kultivēšanas metode ir jutīgāka nekā uztriepes mikroskopija, un tai ir vairākas priekšrocības salīdzinājumā ar pēdējo. Tas ļauj atklāt vairākus desmitus dzīvotspējīgu mikobaktēriju izpētītajā materiālā, un tam ir liela diagnostikas vērtība. Tas ir īpaši svarīgi, pētot materiālu no nesen diagnosticētiem vai ārstētiem pacientiem, kuri izdalās nelielu daudzumu mikobaktēriju.

Salīdzinot ar mikroskopiju, kultūras pētījums var palielināt identificēto tuberkulozes pacientu skaitu par vairāk nekā 15-25%, kā arī pārbaudīt tuberkulozi agrākos posmos, kad slimība joprojām ir labi ārstējama. Ļoti svarīga kultūras izpētes priekšrocība ir iespēja iegūt patogēnas kultūru, ko var identificēt un pētīt saistībā ar zāļu jutību, virulenci un citām bioloģiskām īpašībām.

Audzēšanas metožu trūkumi ietver to ilgumu (materiālu gaidīšanas laiks sasniedz 10 nedēļas). augstākas izmaksas, diagnostikas materiāla sarežģītības apstrāde.

Diagnostikas materiāla ārstēšanas priekšnosacījumi

Parasti tuberkulozes pētījumos nevar izmantot parastās mikrobioloģiskās metodes. Tas ir saistīts ar faktu. ka mikobaktēriju tuberkuloze aug ļoti lēni, un lielākā daļa klīniskā materiāla paraugu satur strauji augošus pērogēnus un putrefaktīvus mikroorganismus, sēnītes. To straujā izaugsme bagātīgo barības vielu vidē kavē mikobaktēriju attīstību un neļauj izolēt tuberkulozes izraisītāju, tādēļ pirms sēšanas jāārstē diagnostikas materiāls. Turklāt no pacienta elpošanas ceļiem izdalītās mikobaktērijas parasti ieskauj liels gļotu daudzums, kas apgrūtina koncentrāciju. Šajā sakarā pirms sēkšanas ar krēpu un citiem līdzīgiem materiāliem ir nepieciešama sašķidrināšana un dekontaminācija.

Visiem mazgāšanas līdzekļiem un dezinfekcijas līdzekļiem ir vairāk vai mazāk izteikta toksiska ietekme uz mikobaktērijām. Ārstēšanas rezultātā līdz 90% mikobaktēriju var mirt. Lai saglabātu pietiekami daudz mikobaktēriju iedzīvotāju, aiztaupot nepieciešamību izmantot apstrādes metodes, kas ļauj, no vienas puses, lai apspiestu strauji augošās pyogenic baktērijas un pretīgs, un no otras puses - saglabāt dzīvotspēju mikobaktēriju esošo materiālu.

Atkarībā no materiāla, tās pakāpi viendabīguma un piesārņojuma iepriekšēja apstrādei, izmantojot dažādus dezaktivatoru: Krēpas - 4% nātrija hidroksīda šķīdums, risinājumi trohzameschonnogo nātrija fosfāta 10%, benzalkonija hlorīds, trinātrija fosfāts, NALC-NaOH (N-acetil-L-cisteīna nātrija hidroksīds) ar galīgo NaOH koncentrāciju 1%, urīnam un citiem šķidrajiem materiāliem - sērskābes šķīdumu 3%, piesārņotiem paraugiem, taukus saturošiem materiāliem - skābeņskābes šķīdumu līdz 5%. Turklāt dažos gadījumos izmantojiet fermentus, virsmaktīvās vielas (mazgāšanas līdzekļus). Tween un dažu citu mazgāšanas līdzekļu lietošana ir saistīta ar mikobakteru šūnu mazāku izdzīvošanu (40-50% izdzīvo). tomēr tos var izmantot tikai šķidriem materiāliem. Visplašāk izplatītajā pasaulē saņēma NALC-NaOH. atbrīvots komplektos. Šī metode ļauj izolēt vairāk nekā 85% mikobaktēriju šūnu populācijas. Audu saturošo cieto materiālu dezaktivēšana ir sarežģītāka, jo ir grūti uzminēt materiāla izkliedes pakāpi homogenizācijas procesā. Piemēram, limfmezglu biopsijas paraugu apstrāde bieži vien ir saistīta ar piesārņojuma ar svešas floras biežumu. Šajā gadījumā var izmantot 1% etoniju.

Nehomogēns materiāls tiek homogenizēts, izmantojot stikla lodītes dezaktivatoru klātbūtnē. Šķidrie materiāli tiek iepriekš centrifugēti un apstrādāti tikai nogulumi.

Sēšanas un inkubācijas paņēmieni

Pēc pirmapstrādes materiāls tiek centrifugēts, kā rezultātā palielinās mikobaktērijas un palielinās to saturs sedimentos ("nogulšņu bagātināšana"). Iegūtās nogulsnes tiek neitralizētas un sēkla ar to (inokulēta) biezu barības vielu vai testa mēģenju virsmu ar šķidru (pusšķidru) barotni. No atlikušās nogulumu daļas, uztriepes tiek sagatavotas mikroskopiskai pārbaudei. Sēšanas tehnikai jānovērš diagnostikas materiāla savstarpēja piesārņošana.

Lai droši klīniski interpretētu mikrobioloģisko pētījumu rezultātus, ir jāievēro šāds noteikums: mikroskopiskie un kultūras pētījumi jāveic paralēli no viena un tā paša diagnostikas materiāla parauga.

Inokulētās caurules 2 dienas horizontālā stāvoklī ievieto termostatā 37 o C temperatūrā. Tas nodrošina materiāla vienmērīgāku absorbciju uzturvielu barotnē. Pēc divām dienām caurules tiek pārvietotas vertikālā stāvoklī un hermētiski noslēgtas ar gumijas vai silikona aizbāžņiem, lai novērstu sējmateriāla izžūšanu.

Kultūras, kas tiek turētas termostatā 37 o C temperatūrā 10-12 nedēļas ar regulāru iknedēļas apskatei. Katrā testa skatījumā tiek reģistrēti šādi parametri:

  • vizuāli novērojams termiņš no sēšanas pieauguma dienas;
  • augšanas ātrums (CFU skaits);
  • stādīšanas piesārņojums ar svešas izcelsmes mikroorganismu floru vai sēnītēm (šādas caurules tiek noņemtas);
  • nav redzama izaugsme. Caurules tiek atstātas termostatā līdz nākamajai apskatei.

Barības vielas

Mikobaktēriju audzēšanai, izmantojot dažādus barojošus līdzekļus; blīvs, pusšķidrs, šķidrs. Tomēr nevienam no zināmajiem barības vielu nesējiem nav īpašību, kas nodrošinātu visu mikobaktēriju šūnu augšanu. Šajā sakarā, lai uzlabotu veiktspēju, ieteicams vienlaicīgi lietot 2-3 dažāda sastāva barības vielas.

Kā standarta barotne tuberkulozes izraisītāja primārai izdalīšanai un tās jutīguma noteikšanai zāles, PVO iesaka Lowenstein-Jensen vidē. Tas ir blīva olu barotne, kurā mikobaktēriju augšana tiek iegūta 20.-25. Dienā pēc bakterioskopiski pozitīva materiāla sēšanas. Bakterioskopiski negatīvā materiāla kultūrām nepieciešams ilgāks inkubācijas periods (līdz 10-12 nedēļām).

Mūsu valstī piedāvātais E.R. Finn Egg Medium Finn II. Tas atšķiras ar to, ka L-asparagīna vietā tā lieto mononātrija glutamātu, kas izraisa citus mikobaktēriju aminoskābju sintēzes veidus. Pieaugums šajā vidē parādās nedaudz agrāk, un mikobaktēriju sekrēcijas biežums ir 6-8% lielāks nekā Levenshtein-Jensen vidē.

Lai uzlabotu ārpuslīnijas tuberkulozes bakterioloģiskās diagnozes efektivitāti, ir ieteicams iekļaut Finn-II modificēto mediju uzturvielu barotnes kompleksā. Lai paātrinātu augšanu, uzturvielu barotnē Finn-II pievieno nātrija tioglikolātu (0,05%), kas samazina skābekļa koncentrāciju. Lai aizsargātu mikobaktēriju fermentu sistēmas no lipīdu peroksidācijas toksiskiem produktiem, α-tokoferola acetāta antioksidants tiek ievests barības vielu vidē Finn-II koncentrācijā 0,001 μg / ml. Diagnostikas materiāla sēšana ar standarta metodi.

Krievijas TB laboratorijās tiek izmantotas arī citas cieto barības vielu modifikācijas; G.G. Mordovijas uzturvielu barotne "Jaunais", ko izstrādājusi V.A. Anikin barības vielu barotne A-6 un A-9 utt.

Sakarā ar to, ka ķīmijterapijas laikā tiek bojātas dažādas mikrobu šūnu metabolisma sistēmas, daļa no mikobakteru populācijas zaudē spēju normāli attīstīties parastos barības vielu vidēs un prasa osmotiski līdzsvarotu (pusšķidru vai šķidru) uzturvielu barotni.

Diagnostikas materiāla sēšanas rezultātu novērtēšana un reģistrēšana

Daži mikobaktēriju celmi un veidi aug lēnām, augšana var parādīties pat 90. dienā. Šo kultūru skaits ir mazs, bet tas ļauj tiem izturēt kultūru termostatā 2,5-3 mēnešus.

Mycobacterium tuberculosis virulentu kultūra parasti aug blīvu olu vidē dažādu izmēru un sugu koloniju R formu veidā. Kolonijas ir sausas, grumbotas, ziloņkaula, nedaudz pigmenti. Citās vidēs Mycobacterium tuberculosis kolonijas var būt mitras. Pēc ķīmijterapijas kursa vai ārstēšanas kursa laikā var atbrīvoties gludas kolonijas ar mitru augšanu (S-formas).

Izdalot kultūraugus, tiek izmantots īpašu pētījumu kopums, lai atšķirtu mikobaktēriju tuberkulozi no tuberkulozes mikobaktērijām un skābes izturīgiem saprofītiem.

Pozitīva atbilde tiek dota pēc obligātas mikroskopiskās pārbaudīšanas ar Zil-Nelsen krāsotiem audiem no audzētām kolonijām. Attiecībā uz mikobaktēriju augšanu uz uztriepes, tiek konstatēti spilgti sarkanie stieņi, kas guļ atsevišķi vai grupās, veidojot klasterus filca vai pīts veidā. Jaunām kultūrām, jo ​​īpaši tiem, kas ilgu laiku ir izolēti no ķīmijterapijas ārstētiem pacientiem, mikobaktērijām raksturīga izteikta polimorfisms, līdz pat sēnīšu micēlijam līdzīgu, īsu, gandrīz kokkoku vai pagarinātu variantu klātbūtnei kopā ar stumbra formas formām.

Mikobaktēriju augšanas ātrumu norāda ar šādu shēmu: (+) - 1-20 KVV mēģenē (ar nelielu baktēriju izdalīšanos); (++) - 20-100 CFU in vitro (mērena bakteriāla izdalīšanās); (+++) -> 100 CFU in vitro (bagātīgas baktēriju izdalīšanās). Tuberkulozes laboratorijas diagnostikā nav pietiekami, lai sniegtu atbildi par to, vai ar vienu vai otru metodi tiek konstatēta mikobaktērija. ir detalizēta izpratne par mikobakteru populācijas apjomu un raksturu, tā sastāvu un īpašībām. Šie dati ļauj pareizi interpretēt procesa stāvokli, plānošanas taktiku un nekavējoties izlabot ārstēšanu.

Pēdējos gados, lai paātrinātu mikobaktēriju augšanu, ir ierosināts uzturvielu barotnes uz agara bāzes ar dažādām augšanas piedevām un īpaša gāzes maisījuma izmantošanu. Lai audzēšanas laikā iegūtu mikobaktēriju augšanu šajās vidēs, izveidojiet atmosfēru ar lielu oglekļa dioksīda saturu (4-7%). Šim nolūkam izmantojiet īpašu ar2-inkubatori. Tomēr visattīstītākās automatizētās sistēmas mikobaktēriju audzēšanai: MGIT-BACTEC-960 un MB / Bact.

Viena no šādām sistēmām ir MGIT sistēma (mikobaktēriju augšanas indikācijas caurule), kas ir saistīta ar augsto tehnoloģiju izstrādi un ir paredzēta, lai paātrinātu tuberkulozes bakterioloģisko diagnozi un noteiktu mikobaktēriju jutīgumu pret pirmās izvēles zālēm un dažām sekundārās zāles. MGIT koncentrējas uz tā izmantošanu kā daļu no VASTES-960 ierīces. Mikroorganismi tiek kultivēti īpašās caurulēs ar šķidru barības vielu, pamatojoties uz modificēto vidējo Middlebrook-7H9. Lai stimulētu mikobakteru augšanu un kavētu svešas izcelsmes mikrofloras augšanu, tiek izmantoti MGIT augšanas papildinājumu augšanas papildinājumi un antibakteriālo līdzekļu PANTA maisījums.

Mikroorganismu augšanas reģistrācija tiek veikta optiski. Tas ir balstīts uz fluorescenci, ko augšanas procesā rada mikobaktēriju skābekļa patēriņš. No skābekli atkarīga fluorohroma krāsa ir ievietota speciālās mēģenes apakšpusē un ir pārklāta ar silikona slāni. Mikobaktēriju pavairošana izraisa skābekļa daudzuma samazināšanos mēģenē un samazina tā koncentrāciju, kas izraisa fluorescences palielināšanos, kas kļūst redzama, kad caurule tiek apstarota ar ultravioleto staru, un automātiski nosaka foto sensori, kas iebūvēti VASTES-960 ierīcē. Spīduma intensitāte, kas reģistrēta izaugsmes vienībās (GU pieauguma vienības). Izaugsmes dati tiek ievadīti datorā, kur to var automātiski saglabāt. Augšanas līkņu datora analīze var sniegt informāciju par dažādu mikobaktēriju grupu klātbūtni, ieskaitot ne-tuberkulozes, un arī palīdz novērtēt mikobaktēriju augšanas īpašības.

Šo sistēmu ieviešanas rezultātā ievērojami samazinājās mikobaktēriju augšanas parādīšanās laiks, vidēji 11 dienas uz ATKĀRTOTI-960 un 19 dienas uz MB / Bact, salīdzinot ar 33 dienām, uz standarta blīvu barības vielu. Jāatzīmē, ka šīm sistēmām ir nepieciešams augsti kvalificēts personāls. Sēšanas materiālam šķidrajos medikamentos jāpievieno sējmašīna uz Levenshteyn-Jensen barotnes, kas ir luksusa apstākļos, kad tuberkuloze neizraisa izaugsmi citos plašsaziņas līdzekļos.

Mikobaktēriju jutīguma pret narkotikām noteikšana

Klīniski nozīmīga ir mikobaktēriju spektra un jutīguma līmeņa noteikšana pret tuberkulozes līdzekļiem, kā arī pret zāļu rezistentu tuberkulozes izplatības epidemioloģisko novērtējumu. Turklāt zāļu izturības kontrole ļauj novērtēt prettuberkulozes programmas efektivitāti kopumā, kas ir neatņemama visu tuberkulozes darbību sastāvdaļu darba indikators.

Zāļu jutīguma daudzveidība un laiks:

  • pirms ārstēšanas sākuma, lai noteiktu ārstēšanas stratēģiju un taktiku:
  • izolējot no pacienta kultūrām no dažādiem materiāliem (krēpas, BAL, urīns, eksudāti, cerebrospinālais šķidrums utt.) tiek pārbaudīti visi izolētie celmi:
  • intensīvas ārstēšanas fāzes beigās, ja nav klīniskās un radioloģiskās dinamikas:
  • ja nepieciešams, mainiet ārstēšanas shēmu, ja:
    • krēpas negatīvuma trūkums;
    • atkārtots kultūre pēc krēpas negatīvuma;
    • krasu KUM skaita palielināšanos uztriepes laikā pēc sākotnējā samazinājuma. Ir labi zināms, ka Mycobacterium tuberculosis celmi, kas pēc zāļu jutīguma viedokļa ir neviendabīgi, tiek izolēti no tuberkulozes slimnieka materiāla. Slimību jutīgums pret tuberkulozes preparātiem var atšķirties zāļu diapazonā, rezistences pakāpi, biežumu un ātrumu.

Mycobacterium tuberculosis zāļu rezistences pakāpi nosaka saskaņā ar noteiktajiem kritērijiem, kas vērsti uz rezistences klīnisko nozīmīgumu un ir atkarīgi no zāļu anti-tuberkulozes aktivitātes, farmakokinētikas un koncentrācijas bojājumā. maksimālā terapeitiskā deva utt.

Mikobaktēriju jutīguma pret narkotikām noteikšana pašlaik tiek veikta ar mikrobioloģiskām metodēm:

  • absolūtās koncentrācijas (atšķaidīšanas metode uz cietā vai šķidrā barības viela),
  • proporcijas
  • pretestības koeficients.

Izturība parasti izpaužas Mycobacterium tuberkuloze koloniju vizuāli novērotās augšanas formā, tomēr ir metodes, kas izraisa augšanu Mycobacterium cell separation sākuma stadijās krāsu reakciju formā. Šīs metodes samazina testa laiku no 3-4 līdz 2 nedēļām.

Krievijā ir plaši izplatīta PVO ķīmijterapijas komitejas ieteiktā absolūtās koncentrācijas metode, kas ir metodoloģiski vienkāršākā, bet prasa augstu laboratorijas procedūru standartizāciju un precizitāti. Zāļu jutīguma tests sastāv no cauruļu komplekta ar uzturvielu barotni, kas modificēta ar prettuberkulozes līdzekļiem. Komplekts sastāv no 2-3 caurulēm ar atšķirīgu katras izmantoto zāļu koncentrāciju, vienu kontroles mēģeni ar vidē bez zāles un vienu mēģeni ar 1000 μg / ml nātrija salicilātu vai 500 μg / ml para nitrobenzoskābi, lai noteiktu ne-tuberkulozes mikobaktēriju augšanu.

Lai sagatavotu medikamentu komplektu ar narkotikām, izmantojot modificētu Medium Lowenstein-Jensen (bez cietei), kas tiek ielejama kolbās. Katrā kolbā pievieno noteiktu daudzumu attiecīgas anti-TB zāļu atšķaidīšanas. Kolbu saturs tiek rūpīgi sajaukts, ielej testa mēģenēs un velmēts 40 minūtes slīpā stāvoklī 85 ° C temperatūrā. Ieteicams vidē izkliedēt elektrisko skrūvgriezi ar automātisku temperatūras kontroli. Medium ar prettulverozes līdzekļiem

1.rindu var uzglabāt ledusskapī 2-4 ° C temperatūrā 1 mēnesi, otrās rindas zāles - ne vairāk kā 2 nedēļas. Uzglabāšanas līdzekļi ar zālēm istabas temperatūrā ir nepieņemami. Sagatavojot anti-tuberkulozes zāļu risinājumus, tiek ņemta vērā to aktivitāte, aprēķinot koncentrāciju, kas pielāgota zāļu nespecifiskās daļas molekulārajam svaram, tīrībai utt. Lai noteiktu zāļu jutīgumu, izmantojot tikai ķīmiski tīras vielas.

Metodes princips ir noteikt anti-tuberkulozes zāļu koncentrāciju, kas kavē ievērojamas mikobakteru populācijas pieaugumu. Pareizi izpildot, šī metode ir laba precizitāte.

Pirms testēšanas ir jāpārliecinās, ka izvēlētajā Mycobacterium tuberculosis kultūrā nav svešas mikrofloras. No mikobaktēriju kultūras 0,9% nātrija hlorīda šķīdumā sagatavo homogēnu suspensiju, kurā ir 500 miljoni mikrobu šūnu 1 ml (optiskā duļķainuma standarts - 5 vienības). Iegūto suspensiju atšķaida ar 0,9% nātrija hlorīda šķīdumu (1: 10) un 0,2 ml suspensijas pievieno katras barotnes komplekta mēģenē. Sētās caurules ievieto termostatā 37 ° C temperatūrā un tiek turētas horizontālā stāvoklī 2-3 dienas tā, lai barības vielas barotnes virsma būtu vienmērīgi inokulēta ar mycobacterium tuberculosis suspensiju. Tad caurules tiek pārvietotas vertikālā stāvoklī un inkubē 3-4 nedēļas. Rezultātu mērīšana tiek veikta 3-4 nedēļas.

Tā kā patogēnu no klīniskā materiāla no barības vielu vidē izdalīšanas laiks ir vismaz 1-1,5 mēneši, zāļu jutīguma noteikšanas rezultātus ar šo metodi var iegūt ne agrāk kā 2-2,5 mēnešus pēc materiāla sēšanas. Šis ir viens no galvenajiem metodes trūkumiem.

Interpretēt mikobaktēriju jutīguma noteikšanas rezultātus, pamatojoties uz noteiktiem kritērijiem. Uz blīviem barotnēm kultūra tiek uzskatīta par jutīgu pret barības vidē esošās zāles koncentrāciju, ja mikobaktēriju koloniju skaits, kas audzē šajā mēģenē ar šo zāļu, nepārsniedz 20, ar lielu augšanu kontroles mēģenē bez narkotikām. Tikai vairāk nekā 20 koloniju klātbūtnē kultūra tiek uzskatīta par izturīgu pret šo koncentrāciju. Praksē, saņemot testa mēģenēs audzēšanas rezultātus, ir gandrīz 20 CFU. ir jāpaziņo klīniskajai vienībai, ka šajā gadījumā jutīgums vai stabilitāte ir robežšķērsojošs, jo dažkārt tas var izskaidrot klīnisko indikatoru izplūdušo dinamiku.

Dažādām zālēm ir izveidota noteikta koncentrācija, kurā tiek novērots kritisko mikobaktēriju populācijas pavairošana. Šīs koncentrācijas sauc par "kritiskām". Kā stabilitātes kritērijs tiek izmantots mikobakteru populācijas augšanas apjoms barības vielu vidē ar zāļu kritisko koncentrāciju.

Vietējā ftizioloģiskā prakse, nosakot zāļu rezistenci, neaprobežojas tikai ar kritisko koncentrāciju noteikšanu. Tas ir saistīts ar faktu. ka paplašinātā patogēna zāļu rezistences līmeņa noteikšana ļauj klīnicistam pareizi veidot ķīmijterapijas taktiku, izmantojot zināšanas par zāļu kombināciju potenciālo iedarbību, paredzēt krustoto rezistenci vai lietot efektīvākus prettuberkulozes zāļu grupas narkotikas.

Absolūto koncentrāciju metode ir visvienkāršākā un visjutīgākā pret tās ieviešanas kļūdām. Drošāk, jo īpaši, nosakot jūtīgumu pret otrās rindas zālēm, un proporciju metode ir izplatīta ārpus Krievijas. Tajā tiek ņemti vērā absolūtās koncentrācijas metodes trūkumi, taču ir daudz laika, lai veiktu.

Metode ir ļoti līdzīga absolūtās koncentrācijas metodei. Testa caurulītes sagatavošana ar vienādi ražotām zālēm. kā ar absolūto koncentrācijas metodi. Tomēr Mycobacterium tuberculosis suspensijas sēšanas devu samazina par 10 reizēm. kas dažu Mycobacterium tuberculosis celmu spontānās rezistences biežumu samazina tādām zālēm kā etambutols, protionamīds, kapreomicīns. Kā kontrole, izmantojiet 2 vai 3 caurules ar sēklu devu, kas ir vienāda ar mēģenēm, kas seriāli atšķaidītas 10 un 100 reizes. Rezistences kritērijs ir Mycobacterium tuberculosis vizuāli novērotā augšanas proporcija. Pirmajā rindā paredzētajām narkotikām ilgtspējības kritērijs ir 1% pieauguma pārsniegums no sākotnējās populācijas, otrās rindas narkotikām - pieaugums ir 1 vai vairāk nekā 10% no sākotnējās, atkarībā no izvēlētās kritiskās koncentrācijas.

1997. gadā PVO un Starptautiskās pretpūšu tuberkulozes savienības darba grupai prettuberkulozes rezistences noteikšanai tika veikti pielāgojumi šiem kritērijiem, kas liecina, ka Levenshteyn-Jensen blīvās olšūnas barotnē audzētās mikobaktērijas tiek uzskatītas par stabilām šādās koncentrācijās:

  • dihidrostreptomicīns - 4 μg / ml;
  • izoniazīds - 0,2 μg / ml:
  • rifampicīns - 40 μg / ml:
  • Etambutols - 2 μg / ml.

2001. gadā kritiskās koncentrācijas tika piedāvātas šādām otrās rindas zālēm (kritiskā 1% daļa):

  • kapreomicīns - 40 μg / ml;
  • protionamīds - 40 μg / ml;
  • kanamicīns - 30 μg / ml;
  • viomicīns - 30 μg / ml;
  • cikloserīns - 40 μg / ml;
  • aminosalicilskābe - 0,5 μg / ml;
  • Ofloksacīns - 2 μg / ml.

Izaugsmes rezultāti tiek novērtēti pēc 4 nedēļām kā provizoriski un pēc 6 nedēļām audzēšanas kā gala.

Lai noteiktu zāļu jutību pret pirazinamīdu, ko plaši izmanto mūsdienu tuberkulozes ķīmijterapijā, ieteicamā kritiskā koncentrācija ir 200 μg / ml. Tomēr joprojām nav vispārpieņemtas metodes zāļu izturības pret šo zāļu noteikšanai cietajos barotnēs, jo tās antibakteriālā aktivitāte izpaužas tikai skābā vidē (pH = C;

  • pigmentu veidošanās trūkums (ziloņkaula krāsa);
  • izteikta skābes izturīga krāsa;
  • pozitīva niacīna mīkla;
  • pozitīvs nitrātu reduktāzes tests;
  • termostabilas katalāzes (68 o C) trūkums.
  • izaugsmes trūkums apkārtējā vidē Levenshteyn-Jensen, kurā ir:
    • 1000 μg / ml nātrija salicilāta,
    • 500 μg / ml paranitrobenzoskābe
    • 5% nātrija hlorīds:
  • izaugsme 1-5 μg / ml tiofen-2-karbonskābes klātbūtnē.
  • Izolētu mikobaktēriju diferenciācijas nozīmīgums ievērojami palielināsies, palielinoties tuberkulozes vai mikobakteriozes izraisītu HIV / AIDS gadījumu reģistrācijas biežumam. Pašlaik nav absolūtas pārliecības, ka praktiskās reģionālās laboratorijas ir gatavas pareizi veikt šo apjomu.

    Tuberkulozes imunoloģiskā diagnostika

    Pastāv vairākas universālas parādības, narkotikas un imunoloģiskie testi, kas sākotnēji tika atklāti tuberkulozes laikā vai imūnreakcijas modelī pret mikobaktērijām. Tās ir BCG un tuberkulīns, tāda parādība kā ādas ādas HAT (tuberkulīna testi - Pirkes un Mantūas reakcijas), reakcija uz tuberkulīna ievadīšanu zemādas jutīgiem dzīvniekiem (Koča fenomens). Dažas pirmās infekcijas slimības antivielas tika atklātas arī tuberkulozes gadījumā. Protams, jo dziļāka izpratne par anti-tuberkulozes imunitātes mehānismiem un to ģenētisko kontroli, jo plašāka var būt imunoloģisko metožu un zāļu lietošana, kas ietekmē imūnsistēmu, lai atrisinātu fizioloģijas praktiskās problēmas.

    Pašlaik vissvarīgākā un sarežģītā praktiskā problēma ir tuberkulozes noteikšana iedzīvotāju masas skrīnings. Tomēr, neskatoties uz daudziem ziņojumiem par "panākumiem" (ierobežotā materiālā), nav piemērota imunoloģiskā metode (reproducēts "jebkurā rokā") un preparāts šiem mērķiem.

    Klīniskajā praksē plaši tiek izmantotas imunoloģiskās metodes, jo īpaši seroloģiskie pētījumi (antigēnu, antivielu noteikšana) un tuberkulīna provokatīvie testi.

    Starp diferenciāldiagnozē izmantotajiem imunoloģiskajiem pētījumiem vispirms ir seroloģiskās metodes - antigēnu un antivielu noteikšana dažādos ķermeņa materiālos.

    Antivielu noteikšanas īpatnība pret mikobaktēriju tuberkulozi ir atkarīga no imūnanalīzes izmantotajiem antigēniem. Ir ierosināts ievērojams daudzums antigēnu, no kuriem pirmais ir tuberkulīna PPD:

    • PPD un citi kompleksie preparāti no kultūras šķidruma;
    • ultraskaņas disintegrācija;
    • Tritona ekstrakts un citi kompleksie preparāti no šūnu sienām;
    • 5 antigēns (Daniels);
    • 60 antigēns (Coccito);
    • lipoarabinomannan;
    • vadu faktors (trehalozes-6,6-di-mikolāts);
    • fenols un citi glikolipīdi;
    • lipopolisaharīdi;
    • fibronektīnu saistošais antigēns;
    • olbaltumvielas (visbiežāk rekombinantā); 81,65,38,34,30,19,18,16,15,12 KDA un citi.

    Krievu un ārvalstu zinātnieku daudzu gadu pētījumu rezultātā atklājās galvenie antivielu ražošanas modeļi un tuberkulozes seroloģiskās diagnozes efektivitāte: jo sarežģītāks ir antigēns, jo augstāka ir jutība un mazāka testu specifika. Specifiskums dažādās valstīs atšķiras atkarībā no M. tuberkulozes un ne-tuberkulozes mikobaktēriju populācijas infekcijas, BCG vakcinācijas utt. Bērniem serodiagnoszes informātiva ir mazāka nekā pieaugušajiem. Primārajā tuberkulozes (bieži bērniem) IgM definīcija ir daudz informatīvāka. ar sekundāru - IgG. Ar HIV inficēto serodiagnostisko informāciju antivielu noteikšana samazinās. Antivielu noteikšanas efektivitāte ir atkarīga no vairākiem "klīniskajiem mirkļiem": procesa aktivitāte (mikobaktēriju "izolācijas" klātbūtne vai neesamība, dobumu esamība, infiltrācijas pakāpe), procesa apjoms, tā ilgums.

    Enzīmu imūnanalīzes (ELISA) metodes jutība ir aptuveni 70%. Pētījuma efektivitātes trūkums ir saistīts ar tā zemo specifiku. Iepriekš tika apsvērta iespēja izmantot seroloģisko skrīningu augsta riska grupās, jo īpaši cilvēkiem ar post-tuberkulozes pārmaiņām plaušās.

    Lai paaugstinātu ELISA specifiskumu, specifiskāku antigēnu meklēšana, ieskaitot tos, kas iegūti ar gēnu inženieriju, turpinās: ESAT-6 un citi (skat. Iepriekš). Stingri specifisku antigēnu (38 kDa, ESAT) izmantošana palielina specifiskumu. bet ievērojami samazina analīzes jutīgumu. Ir ierosināti kopā ar ELISA (eksperimentālās laboratorijas testēšanas sistēmas, piemēram, Pathozyme ELISA komplekts), imūnhromatogrāfijas komplekti ar sānu filtru (Mycodot), kā arī citi līdzīgi testi (skenēšana ar membrānu) ar vizuālu novērtējumu par pētījuma rezultātiem. Veicot šos testus, analīze notiek 10-30 minūšu laikā; tie neprasa īpašu aprīkojumu, ir nepieciešams vizuāli novērtēt rezultātus, kas ir saistīti ar zināmu subjektivitāti. Šīm metodēm ir aptuveni tādas pašas īpašības kā jutīgumam un specifiskumam (attiecīgi 70% un 90-93%) kā tradicionālo ELISA.

    Imūnanalīzes metožu izmantošanai ir noteikta vērtība kā papildu vērtība, kas tiek ņemta vērā izmantoto metožu kompleksā tuberkulozes diferenciāldiagnozē, jo īpaši ārkārtas formu diagnostikā. ELISA ir visefektīvākā tuberkulozes meningīta diagnosticēšanai cerebrospinālajā šķidrumā. Šajā gadījumā analīzes jutīgums ir 80-85%, un specifiskums ir 97-98%. Ir pierādījumi, ka tuberkulozes uveīta diagnozē ir konstatēta antivielu noteikšana pret mikobaktēriju tuberkulozi asaru šķidrumā.

    In vitro gamma-interferona sintēzes indukcija

    Gamma-interferons (IFN-γ) ir specifiskas imūnreakcijas faktors, kas tiek realizēts, aktivējot makrofāgu enzīmu sistēmas. IFN-γ sintēzes indukcija ar sensibilizētiem T-limfocītiem izraisa to mijiedarbību ar mikobaktēriju antigēniem.

    Kā antigēni izmanto kā tuberkulīna PPD. un specifiskie antigēni, kas iegūti ar gēnu inženieriju, jo īpaši antigēni ESAT-6 (agrāk sekretēts antigēns ar molekulmasu 6 kDa) un CFP-10 (olbaltumvielu kultūras filtrsts, 10 kDa). BCG vakcīnas un citu mikobaktēriju šūnās nav ģenētiskās inženierijas vai rekombinanto antigēnu. Izmantojot tuberkulīnu, IFN-γ indukcijas testa rezultāti ir salīdzināmi ar tuberkulīna ādas testu (tiešā korelācija) rezultātiem. Izmantojot ģenētiski konstruētus antigēnus, testa rezultāti ir precīzāki un nav atkarīgi no iepriekšējas BCG vakcinācijas. Pārbaudot vakcinētos indivīdus, kuriem nav saskares ar tuberkulozes infekciju, testa specifika ir 99%. Testa jutīgums pacientiem ar tuberkulozi svārstās no 81 līdz 89%.

    Testa un diagnostikas testi, kuru pamatā ir īstermiĦa pilnvērtīgu asins šūnu vai mononukleāro šūnu audzēšana, kas izolētas no asinīm, in vitro Mycobacterium tuberculosis antigēni, pēc tam nosakot IFN-γ koncentrāciju vai aprēķinot IFN-γ sintezējošo T-limfocītu skaitu. In vitro sintezētā interferona koncentrācija, ko nosaka ar ELISA, izmantojot monoklonālas antivielas, kas saistās ar IFN-γ. Tad, izmantojot kalibrēšanas standartu IFN-γ, nosaka tā koncentrāciju tabletes mēģenē vai caurulēs.

    Veicot Elispot testu, T-limfocītu skaits, kas sintezē IFN-γ. skaitot uz kausa virsmas, pārklāta ar IFN-γ antivielām.

    diagnostikas līdzekļa izstrādātāji, kas balstās uz IFN-γ indukciju in vitro un apstiprināja ASV Narkotiku un produktu aģentūra, apgalvo, ka, izmantojot testu, nav iespējams diferencēt latento tuberkulozes infekciju no aktīva tuberkulozes. Tāpēc reģionos ar augstu infekcijas līmeni testam nav tiešas diagnostikas vērtības. Tomēr mūsu valstī to var izmantot, lai diferencētu tuberkulozes infekcijas bērniem pēc vakcinācijas pret alerģijām, kā arī novērtētu specifiskās imunitātes līmeni ārstēšanas procesā.

    Pašlaik tiek pētīta iekšējā testēšanas sistēma, lai noteiktu IFN-γ sintēzes indukciju ar specifiskiem tuberkulozes antigēniem in vitro.

    Imūnsistēmas stāvoklis un tuberkulozes gaita, imūnkorekcija

    Cilvēku tuberkulozes ārstēšanas procesā ir izmaiņas antigēnēmā un imūnsistēmas stāvoklī.

    Dati par eksudātu un audu izmaiņām lielā mērā ir pretrunīgi. Vienīgais, ko var pamatoti pamanīt, ir tāds, ka tuberkulozes granulomās parasti tiek konstatēts ievērojams skaits aktivēto T-limfocītu.

    Ir lietderīgi apsvērt vēl divus punktus, kas ir nepieciešami, lai izprastu imunoloģisko mehānismu lomu cilvēka tuberkulozes ārstēšanā:

    • AIDS pacientiem ir īpaši augsta rezistences pret multirezistentu sastopamība;
    • Ja zāļu izturība pret vairākām zālēm (un, ja nav inficētas ar HIV), imunitāte (galvenokārt T-šūnu saite) ir īpaši nozīmīga.

    Tuberkulozē plaši tiek izmantotas dažādas imūnkorekcijas metodes: tās galvenokārt ir zāles, kas galvenokārt darbojas T-šūnu imunitātei un mononukleāro fagocītu (iekaisuma hormonu, izofonu, licopidu, polioksidonija uc) sistēmai. kā arī veselas (novājinātas) mikobakterijas un to sastāvdaļas.

    Tuberkulozes molekulārā bioloģiskā diagnostika

    Molekulārās bioloģijas metodes infekcijas slimību diagnostikā galvenokārt ietver metodes, kuru pamatā ir bakteriālu un vīrusu patogēnu manipulēšana ar genomu materiāliem, lai identificētu specifisku ģenētisko materiālu - DNS segmentus ar specifisku šīs sugas vai patogēnu celmu nukleotīdu sekvenci, lai analizētu specifiskas DNS sekvences gēnos, kas nosaka patogēna jutību pret dažām zāļu vielām, kā arī analizē šo funkciju dažu patogēnu gēnu linu aktivitāte. Molekulārās bioloģiskās metodes plaši tiek izmantotas zinātniskos pētījumos un praktiskā pielietojumā dažādu baktēriju un vīrusu infekciju diagnostikā un kontrolē pēc atklāšanas Polimerāzes ķēdes reakcijas Kerijs Mulllis (Nobela prēmijas laureāts 1989) 1985. gadā.

    Polimerāzes ķēdes reakcijas metodes principi un iespējas

    PCR ļauj vairākkārt vairākkārt pagarināt in vitro nukleotīdu sekvenci (patogēnu DNS fragments) miljonos reižu. Reakcijas veikšana vienas DNS virskārtas klātbūtnē nosaka analīzes ārkārtīgi augstu jutību.

    Dažu DNS ķēdes posmu nukleotīdu secība nosaka mikroorganisma ģenētisko identitāti, kas izskaidro PCR augstu specifiku.

    Šīs metodes vērtība Mycobacterium tuberculosis īpašību noteikšanai un pētīšanai ir saistīta ar mikroorganismu bioloģiskajām īpašībām ar ļoti lēnu augšanu: Mycobacterium tuberculosis DNS divkāršošanās laiks audzēšanas laikā ir 12-24 stundas.

    PCR metodes princips ir amplifikācija - daudzkārtēja, miljonos reižu. specifiskas DNS sekcijas reizināšana mēģenē ar mikroviļņu daudzumu, veicot sekojošo trīs reakcijas posmu ciklisku atkārtošanos, no kurām katra notiek dažādā temperatūras režīmā:

    • I posms - divvērtīgo DNS denaturēšana, kad tā tiek apsildīta ar tā ķēdes diverģenci;
    • II stadija - primeru (primer oligonukleotīdu) saistīšanās (hibridizācija) ar precīzi specifisku ķēžu gala posmiem, kas izvēlēti DNS fragmenta pavairošanai;
    • III fāze - DNS fragmenta ķēdes pabeigšana, izmantojot termostabilizētu DNS polimerāzi.

    Lai pastiprinātu in vitro, ir jābūt veidņu DNS molekulām. četru veidu deoksinukleozīdu trifosfāti (nukleotīdi), kas satur atbilstošas ​​slāpekļa bāzes: adenīns (A), timīns (T), guanīns (D), citozīns (C); mākslīgi sintezētas sēklu oligonukleotīdi (praimeri), kas sastāv no 18-20 bāzes pāra; termostabilizējošs DNS polimerāzes ferments, kura optimālā temperatūra ir 68-72 o C, un magnija joni.

    PCR specifika ir atkarīga no DNS fragmenta izvēles. Saskaņā ar to sintēzes sānu olbaltumvielu oligonukleotīdus. Hibrīdizācijas un DNS ķēdes pabeigšanas specifiku nosaka pēc šādu slāpekļa bāzu pāri komplementaritātes principa: adenīntīmīns, guanīns-citozīns.

    Lai noteiktu mikobaktēriju tuberkulozes kompleksa genomu, visefektīvākais amplifikācijas mērķis lielākajā daļā testa sistēmu bija DNS fragmentu IS6110, kas lielākajā daļā mikobaktēriju tuberkulozes celmu genomā ir ievērojams (10-20) atkārtojumu skaits, kas nodrošina līdz ar specifiskumu arī augstu jutīguma analīzi. Tajā pašā laikā ir aprakstīti Mycobacterium tuberculosis celmi ar nelielu skaitu atkārtojumu vai IS6110 fragments nav.

    DNS molekulu izolēšana no bioloģiskā parauga

    Lai veiktu PCR, patogēna DNS molekulas jāizolē no bioloģiskā materiāla minimālā tilpumā, minimāli jānodrošina ne-insipient DNS un dažādi enzīma - DNS polimerāzes inhibitori.

    Paraugu sagatavošana jāveic apstākļos, kas novērš sekrētu DNS molekulu paraugu savstarpēju piesārņošanu. Šim nolūkam ir nepieciešams telpu pirmsapstrādāt ar ultravioleto gaismu, grīdām un galdu un ierīču darba virsmām - hloru saturošiem šķīdumiem. Ir arī nepieciešams izmantot tīrus cimdus, vienreizējās lietošanas caurules un padomus automātiskām pipetēm.

    Lai izolētu Mycobacterium tuberculosis DNS no klīniskajiem paraugiem (cerebrospinālais šķidrums, bronhu lavāža), kas nesatur lielu skaitu leikocītu, šūnu atlieku vai sāļu, pietiek ar centrifūgu parauga pievēršanu 3-4 tūkst. Apgriezienos minūtē, pievieno 20-30 μl 2% šķīdumu nogulsnēs triton X-100 un 30 minūtes sasilda 90 o C temperatūrā.

    Krēpu paraugu sagatavošanai nepieciešams efektīvs atšķaidījums, kurā atkarībā no parauga viskozitātes parasti izmanto 4% nātrija hidroksīda šķīdumu un N-acetil-L-cisteīnu (NALC) 50-80 mg daudzumā vienā paraugā. NALC šķīdums jāsagatavo ex tempore vai NALC pulveri var pievienot sausā veidā tieši paraugam. Pēc atšķaidīšanas paraugus centrifugē 15 minūtes 3,5-4000 apgriezieniem minūtē (3000 g) 50 ml mēģenēs ar skrūvējamu vāciņu, t.i. tādos pašos apstākļos, kādi ir ieteicami krēpas sagatavošanai pirms sēšanas.

    DNS ekstrakcijai no nogulumiem visbiežāk izmanto metodi, kas balstīta uz guanidīna izotiocianāta 5-6 molārā šķīduma izmantošanu kā lizējošo reaģentu un mikroporu silīcija dioksīda daļiņas ("diatomītu"), kas sorbē DNS molekulas. Nonspecifiskas vielas, tostarp iespējamos inhibitorus, pēc tam mazgā 2,5 guarīna izocianāta un etanola šķīdumā, pēc tam DNS molekulas desorbē ūdenī, un šos paraugus izmanto PCR. Lai vienkāršotu DNS ekstrakcijas tehnoloģiju, "diatomītu" bieži aizstāj ar magnētiskajām mikrodaļiņām, kas pārklātas ar silīcija dioksīdu. Tajā pašā laikā centrifugēšanas vietā, lai daļiņām sadedzinātu, izmanto īpašu magnētisko cauruli mikrotestu caurulēm.

    Krievijā ir izveidota oriģināla mikobakteru imūnanalīzes atdalīšanas metode, kam seko patogēnu DNS ekstrahēšana. Miocobaktērijas tuberkulozes imūnanalogētai atdalīšanai izmanto feromulītes ar izmēru 3-5 μm, pārklāti ar silīcija oksīdu, kurai poliklonāla (truša) antivielas pret tuberkulozes mikobaktērijām ir saistītas ar ķīmiskām saitēm. Pēc sārmainās izšķīdināšanas, krēpu paraugi tiek neitralizēti ar skābu Tris-HCl šķīdumu un inkubē ar imunomagnētisko sorbentu. Tad imunopola daļiņas savāc, izmantojot magnētisko stieni ar nomaināmu galu, kas nogulsnējas uz microlans. 20-30 μl 2% Triton X-100 šķīduma tiek uzklāts un 30 minūtes uzsildīts 90 ° C temperatūrā. Uztura virsmu izmanto kā DNS paraugu PCR analīzei.

    Sarežģīta problēma ir Mycobacterium tuberculosis DNS izolēšana no biopsijas paraugiem. Biopsijas lizēšanai izmanto fermentu - proteināzi K ar galīgo koncentrāciju 200-500 mg / l 56 o temperatūrā ar nakts laikā. Tālāk piešķiriet vienu no zināmajām metodēm. Nespecifiskā DNS pārpalikums biopsijas paraugu PCR analīzē bieži vien kavē reakciju, kas prasa atkārtoti ekstrahēt DNS.

    Rezultātu noteikšanas metodes

    Pēc reakcijas pabeigšanas amplificētās patogēnu DNS daļas tiek identificētas, izmantojot dažādas metodes.

    Labi pazīstama gēla elektroforēzes metode. Tajā pašā laikā iegūto DNS fragmentu identificē ar pozitīvu kontroli, kas satur vēlamo specifisko DNS fragmentu vai iepriekš zināmo fragmenta izmēru (nukleotīdu poru skaitu), kuru nosaka, izmantojot standarta molekulāro marķieri.

    Konkrēta krāsa, ēdiija bromīds, ir iekļauta divdaļīgajā DNS. Sintēzes DNS fragments tiek noteikts kā ultravioleto starojumu kvēlošs josla.

    DNS fragmenta izmērs, ko nosaka ar elektroforēzi attālumā no sākuma, jāatbilst zināmam molekulmasas marķierim vai pozitīvai kontrolei.

    Citas PCR rezultātu noteikšanas metodes ir balstītas uz vienas ķēdes PCR produktu hibridizāciju ar biotīnam marķētu DNS zondu, kas tām komplementārs, un pēc tam nosaka ar fermentatīvo reakciju, piemēram, saistot ar streptovidīna-sārmainās fosfatāzes konjugāta biotīnu.

    Pamatojoties uz šāda veida noteikšanu, tika izveidoti PCR analizatori, kuros PCR rezultātu noteikšana tiek veikta automātiski, ņemot vērā optisko blīvumu paraugos pēc tam, kad ir notikusi fermentatīva reakcija.

    Šo metožu trūkumi ir intralaboratīvā piesārņojuma iespējas ar diezgan īsiem DNS molekulu fragmentiem. Šīs molekulas, kad tās tiek izlaistas jaunizpētītajos paraugos, kļūst par PCR matricu un noved pie kļūdaini pozitīviem rezultātiem.

    Šajā sakarā, lai novērstu kļūdaini pozitīvus rezultātus, tiek ieviesti stingri noteikumi telpu nodalīšanai un izolēšanai: lai izdalītu DNS no bioloģiskiem paraugiem; telpas, lai noteiktu rezultātus (elektroforēzi) no tīras zonas. Šie numuri ir iespējamās piesārņojuma zona. Vēl viena izolēta teritorija ir tīra telpa, kurā DNS testa paraugus ievada mēģenēs ar PCR reakcijas maisījumu. Visbeidzot, tiek pieņemts, ka galvenā ierīce - DNS pastiprinātājs - jāpārvieto uz atsevišķu, iespējams, biroja telpu.

    Lai novērstu piesārņošanu ar iepriekšējo reakciju produktiem - ar ampikoniem, dažās PCR testēšanas sistēmās deoksinukleozīda timidīna vietā ir deoksinukleosidurīds, kuru vietā in ķēžu sintēzes vietā ievieto in vitro, t.i. slāpekļa bāziskais timīns, kas atrodas dabiskajā DNS, tiek aizstāts ar uracilu. Uracila DNS glikozilāze, kas reakcijas maisījumam pievienota analizējamam materiālam, iznīcina tikai piesārņojošos fragmentus ar dezoksiruridīnu, bet ne dabisko analizēto DNS. kas satur dezoksittimidīnu. Turpmākā apsildīšana pie 94 o C inaktivē šo enzīmu un netraucē PCR amplifikācijai.

    Pastāv testa sistēma, kas pamatojas uz rRNS izotermālo amplifikāciju, kurā vispirms tiek veikta DNS molekulu reversā transkripcija un sintēze. kas, savukārt, ir paraugs vēlākai RNS molekulu sintēzei. RNS amplikoni tiek atklāti, izmantojot reakcijas mēģenes šķīdumā hibridizāciju, izmantojot akridīna krāsotu DNS zondi. Šai metodei papildus augstajai jutībai ir priekšrocība veikt analīzi vienā mēģenē, kas novērš piesārņojumu. Pēc autoru domām, šīs metodes jutīgums elpošanas paraugos sasniedz 90% ar specifiskumu 99-100%.

    Jaunas noteikšanas metodes tiek ieviestas reālā laika PCR. Šīs metodes galvenokārt atšķiras ar to, ka PCR un tā rezultātu noteikšana tiek veikta vienlaicīgi vienā slēgtā mēģenē. Tas ne tikai tehnoloģiski vienkāršo analīzes metodi, bet arī novērš laboratorisko telpu un testa paraugu piesārņošanu ar produktiem, kas ir pirms PCR.

    Reāllaika PCR rezultātu atklāšana rodas fluorescences dēļ, ko rada fluorogēnas DNS zonējuma hibridizācija ar specifisku DNS fragmentu, kas amplificēts PCR. Fluorogēno DNS zondes struktūra ir konstruēta tā, ka fluorescējošais marķieris tiek atbrīvots fermentatīvas reakcijas rezultātā vai attālināts no fluorescences izsmidzinātāja molekulas tikai specifiskas hibridizācijas laikā ar vēlamo DNS molekulu, kas amplificēta PCR. Palielinoties molekulu skaitam, kas ir hibridizēts ar zondi, fluorescences pieaugums līdz nosakāmam līmenim ir proporcionāls pastiprinātā produkta molekulu skaitam. Tā kā katra PCR cikla laikā DNS fragmentu molekulu skaits dubultojas, cikla skaitlis, no kura nosaka un palielina fluorescenci, ir apgriezti proporcionāls DNS molekulu skaitam sākotnējā paraugā. Ja reakcijā kā kalibrators tiek ievadītas vairākas atšķirīgas zināmas Mycobacterium tuberculosis DNS fragmenta molekulu koncentrācijas, tad DNS genomu skaitu pētāmā materiālā var aprēķināt, izmantojot datorprogrammu.

    Katrs standarta paraugs ir dublēts. Kvantitatīvais kritērijs ir minimālais PCR ciklu skaits, kas vajadzīgs konstatētās fluorescences sākšanai un izaugsmei. Absolūcija ir ciklu skaits; ordinācijas ass ir fluorescences vērtība. DNS koncentrācija ir apgriezti proporcionāla ciklu skaitam, kas nepieciešams fluorescences parādīšanās. Labās kolonnas (21-32) logos ir atzīmēti ciparu skaitļi attiecīgajās koncentrācijās. Atšķirības starp 10-kārtīgām DNS fragmentu koncentrācijām 10 2 -10 6 ml - 3,2-3,4 cikli. Diviem pacientiem IS6110 fragmenti bija aptuveni 10 3 / ml un 10 4 / ml. Ņemot vērā analizēto fragmentu atkārtojumu (6-20) skaitu Mycobacterium tuberculosis genomā, mikobaktēriju skaits klīniskajos paraugos ir attiecīgi aptuveni 100 un 1000 šūnas.

    PCR izmantošana tuberkulozes diagnostikā

    PCR metode visbiežāk tiek izmantota, lai paātrinātu tuberkulozes diagnostiku - mikobaktēriju tuberkulozes noteikšana klīniskajos paraugos: krēpas. bronhu mazgāšana, pleiras eksudāts, urīns, cerebrospinālais šķidrums, osteolīzes perforatori, sieviešu dzimumorgānu aspirāti un dažādi biopsijas paraugi. Pētījumā Holandē tika pētīta 500 paraugu krēpu un bronhiālās uztriepes no 340 pacientiem ar apstiprinātu plaušu tuberkulozes diagnozi, PCR, kultūras un smēres mikroskopijas salīdzinošā jutība. Analīzes jutīgums attiecīgi bija 92.6.88.9 un 52.4%. Šajā gadījumā visu metožu specifika bija aptuveni 99%.

    Salīdzinājumā ar mikobaktēriju tuberkulozes noteikšanas efektivitāti, izmantojot smidzināšanas mikroskopijas metodes, sējumus uz Lowenstein-Jensen vidēm, ATKRITUMU testa sistēmu un PCR analīzi. PCR bija 74,4% jutīgums, mikroskopija - 33,8%, sējmašīna uz bieza vidē - 48,9% un ATKRITUMI - 55,8%. Vidējais noteikšanas laiks Levenshtein-Jensen vidē ir 24 dienas. ATKRITUMI - 13 dienas, PCR - 1 diena.

    Tiek apspriesta arī iespēja izmantot PCR kā jutīgu un ātru metodi, lai kontrolētu tuberkulozes ārstēšanas efektivitāti.

    Mycobacterium tuberculosis DNS noteikšana ar PCR ar efektīvu ķīmijterapiju tiek noteikts uz ilgāku laiku - vidēji 1,7 mēneši, salīdzinot ar dienasgaismas mikroskopijas konstatēto baktēriju sekrēciju, un 2,5 mēnešus, salīdzinot ar bakterioloģisko izmeklēšanu.

    Ārpuslugu tuberkulozes diagnostika

    PCR kā jutīgas metodes vērtība ir īpaši liela ārpulmonārām formām, jo ​​šajās formās klīniskās rentgena metodes un tradicionālās bakterioloģiskās metodes, lai konstatētu mikobaktēriju tuberkulozi diagnostikas materiālos, ir neefektīvas.

    Pārbaudot urīna paraugus, 16 no 17 pacientiem ar urīnceļu aktīvo tuberkulozi tika konstatēti PĶR analīzes rezultāti un negatīvi 4 pacientiem ar nieru neaktīvo tuberkulozi un 39 pacientiem ar urīnceļu bez tuberkulozes slimībām.

    PCR analīzes efektivitāte tika pierādīta kaulu smadzeņu aspirātu pētījumos pacientiem ar drudzi ar neskaidru ģenēzi ar aizdomām par slimības tuberkulozes raksturu. Tuberkulozes limfadenīta diagnozei bērniem tika pētīti 102 punkcijas aspirāti un biopsijas paraugi 67 bērniem ar aizdomām par tuberkulozo limfadenītu. Pozitīvi rezultāti tika iegūti: reālā laika PCR - 71,6%. fluorescences mikroskopija - 46,3%. kultūras studijas - 41,8%. Pētījumā ar 50 limfmezglu biopsijām pacientiem ar kaķu skrāpējumiem, visi rezultāti bija negatīvi. Tādējādi pierādīta 100% specifiskā PCR analīze. Tajā pašā darbā ar limfmezglu punkcijas biopsiju tika parādīta iespēja atklāt M. avium.

    Kā zināms, sieviešu dzimumorgānu tuberkulozes diagnostika ar neauglību ir viena no visgrūtākajām diagnostikas problēmām. Pētījumos, kuros tika izmantoti endometrija biopsiju, endometrija aspirātu un šķidruma paraugi no Douglasa vietas, tika iegūti pozitīvi rezultāti 14 (56%) no 25 pacientiem, kuri bija laparoskopiski pārbaudīti ar aizdomām par tuberkulozi. Izmantojot uztriepes mikroskopijas un kultūras pētījumus, tika iegūti attiecīgi 1 un 2 pozitīvi rezultāti. Šie gadījumi bija arī PCR pozitīvi. Lielākā daļa PCR pozitīvu rezultātu saistībā ar gadījumiem ar raksturīgām tuberkulozes pazīmēm pēc histoloģiskās izmeklēšanas; mazāks skaits - ja rodas aizdomas par tuberkulozi pēc laparoskopijas. Tika iegūta tikai viena pozitīva PCR analīze, ja nav laparoskopisko datu par tuberkulozi.

    Diagnozējot ārpuslīnijas tuberkulozes formas, klīnicistiem bieži rodas jautājums par iespējamību identificēt patogēnu asins paraugu PCR pētījumā. Literatūras dati liecina, ka Mycobacterium tuberculosis DNS atrašana no asins paraugiem ir iespējama ar progresīvām HIV infekcijas formām. Mycobacterium tuberculosis DNS tika konstatēta tikai ģeneralizētas dažādu orgānu tuberkulozes gadījumā pacientiem ar transplantētu nieru un imūnsupresiju.

    Mika baktēriju sugu identifikācija

    PCR metode var būt diezgan efektīva mikobaktēriju tuberkulozes kompleksa un dažu veidu ne-tuberkulozes mikobaktēriju ātrai identificēšanai pēc sākotnējās augšanas. Šajā gadījumā PCR izmantošana var ietaupīt 7-10 dienas, kas nepieciešamas, lai pēc tam kultūras identificētu pozitīvu rezultātu. Pētījums ar PCR ir tehniski ļoti vienkāršs, jo tas neprasa sarežģītu klīniska materiāla paraugu sagatavošanu, lai sasniegtu augstu jutību. Pētot 80 pozitīvās kultūras šādā testa sistēmā (MB VasT no Organon firmas), visi PCR analīzes pozitīvie rezultāti bija stingri specifiski un tika veikti 1 dienu. Lai noteiktu citu sugu mikobaktēriju sagatavošanā DNS patogēnu kultūras hibridizē īpašiem DNS zondēm marķētas ar akridīnu un atklāto izskatu hemiluminiscenci caur chemiluminometer vai nitrocelulozes sloksnīšu ar vizuālo novērtējumu pēc hibridizācijas celmu. Ar šo komplektu tiek identificēts ierobežots skaits sugu: Mycobacterium tuberculosis komplekss. M. avium, M. avium komplekss, M. kansāzi un M. gordonae.

    A.Telenti et al. viņi arī izstrādāja salīdzinoši vienkāršu un lētu metodi klīniski nozīmīgu mikobaktēriju identificēšanai pēc PCR un pēc tam apstrādes ar diviem ierobežojošiem enzīmiem (fermentus, kam ir īpašības, lai samazinātu DNS molekulu konkrētos punktos). Kad tas tiek pastiprināts, DNS fragments. kodē siltuma šoka olbaltumvielu (65 kDa), pēc kura 439 nukleotīdu poru DNS fragmentu, kas iegūti ar PCR, atsevišķi apstrādā divi fermenti - Bste II un Hae III. Tad, izmantojot agarozes gela elektroforēzi, analizē divus iegūtos produktus, nosakot to lielumus (nukleotīdu pāru skaitu), izmantojot standarta DNS fragmenti (molekulārās DNS marķieri) ar garumu no 100 līdz 1000 nukleotīdu pāriem. Katrā noteiktā sugā (M. tuberculosis, M. avium, M. intracellulare, M. kansasii, M. fortuitum) katram ierobežojošajam enzīmam ir atrodami 2 vai 3 dažāda izmēra DNS fragmenti. Dažādu izmēru iegūto DNS fragmentu kombinācija ļauj savstarpēji atšķirt šīs sugas.

    Tiek izstrādāta bioloģisko DNS mikroshēmu tehnoloģija. kas palīdzēs identificēt vairāk nekā 100 mikobaktēriju veidus vienā pētījumā.

    Sugas identifikāciju var veikt arī, izmantojot 16S rRNS mainīgā reģiona PCR amplifikāciju, kam seko amplikonu sekvencēšana, salīdzinot ar atbilstošo primāro struktūru, kas ļauj identificēt vairāk nekā 40 mikobaktēriju sugas.

    Izmantojot PCR, sugu identifikāciju var veikt arī Mycobacterium tuberculosis kompleksā, ieskaitot M. bovis un M. bovis BCG diferenciāciju. Šim nolūkam tiek analizēta atsevišķu gēnu klātbūtne vai trūkums RD1 genoma reģionos. RD9 un RD10. RD1 nav sastopams M. bovis BCG, bet ir sastopams vīrusu izraisītās sugās, ieskaitot M. bovis.

    Mycobacterium tuberculosis zāļu jutīguma noteikšana, izmantojot PCR

    Molekulāro ģenētisko metožu uzdevumi, lai noteiktu Mycobacterium tuberculosis zāļu jutību vai rezistenci, tiek samazināti līdz zināmu gēnu noteikto nukleotīdu secību identificēšanai. Galvenās metodes ir balstītas vai nu uz šo sekvenču tiešo lasīšanu (sekvencēšanu) pēc amplifikācijas, vai arī ar biotīnam iezīmētu DNS fragmentu hibridizāciju, kas amplificētas PCR ar DNS zondēm. Abas alternatīvas ietver tādu nukleotīdu aizvietotas sekvencēm, ka, izmantojot DNS zondes noved pie trūkuma vai nepilnīgu hibridizācija uz nitrocelulozes membrānu, izmantojot fermenta konjugātu (streptavidīns-sārmainās fosfatāzes) - metode Lipa-Rif-TB.

    Fluorescences mērīšanas metode DNS zondēs, kas lokāli tiek fiksētas mikrosīs, kas ir komplementāri zināmām mutācijām gripu PCR amplitīvētajos reģionos, kuri ir atbildīgi par zāļu jutību vai rezistenci, sauc par mikrobihikopu metodi. Pamata algoritms šī pētījuma veikšanai ir šāds. Pēc tam, kad izolē DNS no klīniskā parauga vai kultūras mikobaktēriju ir nepieciešams, lai veiktu PCR amplifikāciju attiecīgo fragmentu rpoB gēns, kas atbild par narkotiku jutību pret rifampicīnu vai katG un inhA gēnu, kas kodē olbaltumvielas Mycobacterium ir atbildīgs par jutību pret izoniazīdu. PCR rezultāti tiek novērtēti, izmantojot agarozes gela elektroforēzi, kas apstiprina vajadzīgo garumu atbilstošo DNS fragmentu sagatavošanu. Tam seko otrā PCR kārta fluorescējošās etiķetes ievadīšanai DNS. PCR rezultāti atkal tiek apstiprināti ar gēla elektroforēzi. Pēc tam, hibridizācija tika veikta (nakti inkubācija), kam seko mazgājot iegūto materiālu par biochip, kas ir liels skaits fiksēto mazā stikla plākšņu īsos DNS šķiedrās (zonde), kas papildina nukleotīdu sekvences narkotiku-jūtīgs tipa Mycobacterium tuberculosis vietās iespējamo mutāciju. kā arī mutāciju sekvences, kas atbildīgas par zāļu rezistenci. Stingri jānosaka DNS zondes izvietojums uz plāksnes, un tiek noteikts novērotā fluorescences līmenis hibridizācijas laikā, lai noteiktu rezultātu, izmantojot īpašu lasītāju. Šajā sakarā analīzes rezultātus nosaka, izmantojot īpašu datorprogrammu.

    Pēdējos gados ir izstrādātas alternatīvas metodes Mycobacterium tuberculosis zāļu jutīguma noteikšanai, pamatojoties uz reālā laika PCR tehnoloģiju, ļaujot šos pētījumus veikt slēgtā mēģena režīmā.

    Attēlā 13-13 parāda Mycobacterium tuberculosis klīnisko kultūru analīzes rezultātus, nosakot zāļu izturību pret rifampicīnu, izmantojot reālā laika PCR: 218 - kontroles paraugs (jutīgs pret rifampicīnu); 93 - Pozitīva Ser-Trp TCG-TGG mutācijas pozitīva kontrole; 4482 - pozitīva kontrole Ser-Leu TCG-TTG mutācijām; 162-322 - eksperimentālie paraugi. 4 kanālu kinētiskās pastiprināšanas līkņu aprēķina rezultāts: kanāls 1: 393 - Ser-Trp TCG-TGG mutācijas pozitīvā kontrole; kanāls 2: 4482 - Pozitīva kontrole Ser-Leu TCG-TTG mutācijām; 162, 163, 172, 295 - eksperimentālie paraugi; 4. kanāls: eksperimentā iesaistīto visu paraugu kinētiskās amplitūcijas līknes. Pozitīvas kontroles amplifikācijas reakcija. Secinājumi: analīzes rezultāti atklāja šādas mutācijas, kas nosaka rezistenci pret rifampicīnu: paraugos 162,163,172,295 - Ser-Leu TCG-TTG. To pašu principu izmanto, lai noteiktu zāļu rezistenci pret izoniazīdu katG un inhA gēniem, kas nosaka biežākās mutācijas.

    Mikobaktēriju tuberkulozes celma identifikācija

    Vairumā rūpīgi pētīta metode no identifikācijas celmu Mycobacterium tuberculosis ir paņēmiens, ko sauc par restrikcijas fragmentu garuma polimorfisma (RFLP RFLP,. Vai angļu variantā) un kas ir balstīta uz fragmentirovanin (ierobežojuma) no Mycobacterium tuberculosis DNS fermentu Pvu II un fragmenti, ko iegūst turpmāku hibridizāciju ar dažiem konkrētiem sekvencēm DNS tā atkārtotais elements ir IS6110. Intraspecifiskā atšķirība tiek realizēta, ņemot vērā atšķirīgo skaitu IS6110 atkārtojumu un to atrašanās vietu DNS. kā arī dažādu attālumu starp noteiktiem enzīmu ierobežojuma (ierobežošanas vietu) uzbrukuma punktiem un elementu IS6110. Šī tehnoloģija ir ļoti sarežģīta un laikietilpīga. Pēc ārstēšanas ar DNS, kas iegūta no kultūras Mycobacterium tuberculosis, gēla elektroforēzi tiek veikta ar restrikcijas enzīmu, un pēc tam pārvieto DNS fragmentus dažāda garuma uz nitrocelulozes membrānu, hibridizācija tika veikts ar fragmentiem IS6110-elementu un noteikt ar enzīmu reakcijās. Iegūtais specifiskais joslu modelis raksturo konkrēta Mycobacterium tuberculosis celma DNS. Izmantojot datora analīzi, atklāja celmu identitāti vai līdzību. Lai gan RFLP metode ir visvairāk diskriminējošā, t.i. atklāj vislielāko atšķirību skaitu analizētajos celmos, tas ir neefektīvs ar nedaudzu (mazāk par 5) IS6110 atkārtojumiem, kas novēroti dažos celmos. Attēlā 13-14 apraksta celmu RFLP rakstīšanas rezultātus.

    Alternatīva var būt spoligotyping (spoligotyping) metode - plazmas DNS sekvenču polimorfismu analīze - starpība starp DR reģiona tiešajiem atkārtojumiem. Veicot spoligotipizāciju ar celmiem, PCR veic ar primeriem, kas ierobežo DR reģionu, pēc tam tiek veidoti dažāda garuma fragmenti, kas hibridizējas ar mainīgiem starpposma DNS apgabaliem. Tiek sniegta DR reģiona starpliku secību analīze. pēc pētnieku domām, tas ir vienkāršāks, produktīvāks un piemērots primārai celmu skrīningam un provizoriskai epidemioloģiskai analīzei, kā arī tieši klīniskā materiāla pētījumam.

    Acīmredzot efektīvāka un tehnoloģiski pieejamāka metode ir VNTR (angļu vārdu saīsinājums) vai arī metode, kā noteikt precīzu tandēmu atkārtojumu mainīgo skaitu Mycobacterium tuberculosis DNS. Šī metode ir balstīta tikai uz PCR izmantošanu un neprasa papildu manipulācijas. Tā kā atkārtotu tandēmu skaits dažādos celmos un dažādās lokās ir atšķirīgs, dažādu izmēru fragmentus nosaka un analizē, iegūstot PCR produktu elektrofororegrāfu. Pēc pētnieku domām, ar VNTR palīdzību tiek panākta lielāka celmu diskriminācijas pakāpe nekā RFLP metodei.

    Pēdējos gados liela uzmanība ir pievērsta W-Pekinas ģimenes Mycobacterium tuberculosis celmu izplatībai (dažreiz to sauc par Pekinas celmu), kas lielā mērā ir atkarīgi no zāļu lietošanas.

    Molekulāro bioloģisko pētījumu kvalitātes pamatprasības

    Pamata reglamentējošie dokumenti PCR

    Krievijas Veselības ministrijas rīkojumi: 2000. gada 7. februārī Nr. 45, Nr. 109, 2003. gada 21. marts Nr. 64. 2000. gada 21. februāris. Metodiskie norādījumi: 1.3.1888-04 "Darba organizācija PĶR pētījumos ar inficēto patogēno bioloģisko III-IV patogenitātes grupu aģenti "; 1.3.1794-03 "Darba organizācija I-II patogenitātes grupu mikroorganismu inficēta materiāla PCR pētījumos". 2003; 3.5.5.1034-01 "Testa materiāla, kas inficēts ar I-IV grupas patogenitāti inficētām testa vielām, dezinficēšana, izmantojot PCR metodi", 2001. gada 11. pielikums. Institūcija, kas izstrādājusi vienotu mikrobioloģisko pētījumu metodiku tuberkulozes noteikšanai, diagnosticēšanai un ārstēšanai.

    Personāls

    Klīniskās laboratoriskās diagnostikas ārsti, bakteriologi, virologi, klīniskās diagnostikas laboratorijas biologi, kā arī speciālisti ar vidējo medicīnisko izglītību, kuri ir nokārtojuši specializāciju un kvalifikācijas celšanu noteiktā veidā, var veikt molekulāro bioloģisko pētījumu.

    Ierīces telpu laboratorija

    Ir nepieciešamas šādas laboratorijas iekārtas:

    • Parauga apstrādes zona ir laboratorija, kas pielāgota darbam ar III-IV grupu infekcijas izraisītājiem patogēnas, saskaņā ar metodoloģijas vadlīnijām 13.1888-04.
    • Zona reakcijas maisījumu sagatavošanai PCR - laboratorijas telpa, kas nodrošina aizsardzību pret iekšējo laboratorijas piesārņojumu - "tīra" zona.
    • • Ja PCR produktus analizē, izmanto elektroforēzi vai hibridizāciju. laboratorijas telpa, kurā pavairošanas DNS fragmentus ekstrahē no amplitūdas caurules un attiecīgi var izdalīties vidē saskaņā ar prasībām attiecībā uz PCR laboratorijām (Pamatnostādnes 1.3.1794-03, vadlīnijas 1.3.1888-04) jābūt pilnībā izolēts no telpām, kas norādītas iepriekšējos punktos. Jāizslēdz kustība no elektroforēzes zonas uz paraugu pārstrādes zonu un jebkura personāla, aprīkojuma, materiālu un priekšmetu "tīru" zonu, kā arī gaisa padeves caur ventilācijas sistēmu vai caurlaides rezultātā. Šī zona nav nepieciešama PCR produktu fluorimetriskai noteikšanai.
    • Dokumentu un rezultātu apstrādes telpa ir aprīkota ar datoriem un nepieciešamo biroja aprīkojumu. Iekārta var atrasties šajā telpā, lai noteiktu PCR produktus, neatverot mēģeni. - fluorescējošie PCR detektori un termocikleri reālā laika PCR.

    Higiēnas un epidemioloģiskās prasības primārajai krēpas ārstēšanai ir līdzīgas standarta mikrobioloģiskajām prasībām darbā ar tuberkulozes mikobaktērijām.

    Pilns komplekts laboratorijas iekārtas PCR diagnostikai

    Laboratorijas komplektā ietilpst aprīkojums šādām telpām.

    • Paraugu sagatavošanas telpā ir iekļauts šāds aprīkojums: laminārā II aizsardzības klase "SP-1.2": cietvielu termostats ar apsildāmu vāku Eppendorf tipa caurulēm; mikrocentrifuga pie 13 000 apgriezieniem minūtē; centrifūga ("Vortex"); ledusskapis ar temperatūras diapazonu no -20 ° C līdz +10 ° C; mainīgas tilpuma pipetes no Proline sērijas; sūknis ar OM-1 kolbas sifonu; pipetes statīvs; statīvs darba vietā 200x0,5 ml; statīvs darba vietā 50x1,5 ml; glabāšanas kameru plaukti 80x1,5 ml;
    • reakcijas maisījuma sagatavošanas telpa: aizsardzības kameras PCR kaste ("Laminar-C 110 cm); centrifūga - "Vortex"; mainīgas tilpuma pipetes no profesionālās sērijas; pipetes statīvs; statīvs darba vietā 200x0,2 ml; glabāšanas kameru plaukti 80x1,5 ml; ledusskapis ar temperatūras diapazonu no -20 ° C līdz + 10 ° C;
    • elektroforēzes telpa: kamera horizontālā elektroforēzei; elektroapgāde; transilluminātājs;
    • Nukleīnskābju (reālā laika PCR) DNS amplifika tors vai analizators ar datoru un programmatūru; var ievietot jebkurā brīvā telpā. Ja izmantojat PCR tehnoloģiju reālajā laikā. elektroforēzes telpa nav nepieciešama.

    Ārējā kvalitātes kontrole

    Lai pārliecinātos iegūt objektīvi ticamus rezultātus, laboratorijām būtu jāpiedalās laboratorijas pētījumu ārējās kvalitātes novērtēšanas sistēmā.

    Kvalitātes kontroles sistēmas dalībnieki saņem; 12 ampulas ar baktēriju šūnu liofilizētām suspensijām, no kurām divas satur E. coli E. coli, 3 ampulas ar mikobaktēriju tuberkulozi (avirulentu celmu) koncentrācijā 10 2 / ml; 3 ampulas ar līdzīgu celmu šūnām koncentrācijā 10,4 / ml; 2 ampulas ar ne-tuberkulozām mikobaktērijām M. avium-intracellulare un M. kansasii koncentrācijā 10 5 / ml.

    Izplatītie ārējās kvalitātes novērtēšanas testi ir iepriekš pārbaudīti divās neatkarīgās laboratorijās, kurām ir plaša pieredze šajā jomā.